微波輔助酶解技術(shù)在蛋白及多肽研究中的應用.pdf

1、微波輔助酶解技術(shù)作為一種高效快速的蛋白酶解技術(shù)，具有作用時間短，酶解速度快、酶解產(chǎn)物可控等特點，近年來被應用于蛋白組學分析及多肽分離與分析中。微波輔助酶解技術(shù)主要包括自由酶酶解以及微波輔助固定化酶酶解等，自由酶酶解由于酶活相對較高而成為主要研究手段。而固定化酶技術(shù)具有酶與產(chǎn)物易分離的特點。本文采用微波輔助自由酶以及固定化酶技術(shù)，以廣西特色資源食材銀杏蛋白和野生黑螞蟻蛋白為原料研究兩種蛋白的快速與定向酶解，對微波輔助自由酶酶解以及基于磁性

2、材料固定化酶酶解技術(shù)進行了研究并對實驗條件進行了優(yōu)化，主要研究內(nèi)容如下：
　　 (1)對微波輔助自由酶酶解螞蟻蛋白進行了研究。幾種蛋白酶的優(yōu)化結(jié)果表明木瓜蛋白酶對螞蟻蛋白具有較好的酶解效果。在溫度50℃、底物濃度0.02g/mL、酶解時間60 min、給酶量5500 u/g的條件下，在功率為300 W的微波作用下，螞蟻蛋白酶解率能夠達到62.40％，優(yōu)于常規(guī)水浴酶解6h的蛋白酶解率(50.83%)。對酶解液的總抗氧化性以及DPP

3、H自由基清除實驗表明，酶解過程產(chǎn)生的多肽混合液具有一定的活性。凝膠電泳法表明酶解產(chǎn)物的分子量分布主要在14.4KDa以下。HPLC分析表明：在微波輔助作用下，木瓜蛋白酶可以較好地對螞蟻蛋白進行酶解，可產(chǎn)生豐富的多肽片段。
　　 (2)研究了微波輔助下化學共沉淀合成Fe3O4磁性粒子，并以Fe3O4磁性材料為載體研究木瓜蛋白酶的固定化。對戊二醛的濃度、給酶量以及固定化時間等固定化條件的優(yōu)化研究表明，戊二醛濃度為3.75%、給酶量為

4、0.4 mg/mL、固定化時間為4h時獲得的固定化酶效果最佳，酶的固定化效率達52.03%。在微波輔助的條件下對螞蟻蛋白進行酶解(50℃，60 min)，酶解率達31.75%。對固定化酶和自由酶的酶解率、酶解液的抗氧化活性和DPPH自由基清除能力的對比實驗表明，固定化木瓜蛋白酶能夠用于螞蟻蛋白的酶解，SDS-PAGE和HPLC對酶解物的對比分析表明，酶解液中多肽片段的差異導致了酶解液生物活性的差異。
　　 (3)在微波作用下，分