ATF4重組慢病毒對成骨和軟骨細胞增殖凋亡的影響及PGRN---小鼠骨損傷愈合的初步研究.pdf

1、目的:構建人的活性轉錄因子4(ATF4)基因慢病毒載體并包裝慢病毒顆粒(lentivirus)，探討ATF4基因慢病毒修飾對成骨和軟骨細胞增殖凋亡的影響；同時對PGRN-/-小鼠骨損傷愈合進行初步研究。
　　方法:將帶有目的基因ATF4的慢病毒載體質粒pWPT-GFP-ATF4與慢病毒包裝骨架質粒pSPAX2、pMD2G共同轉染293T細胞中，包裝成ATF4慢病毒(LV-ATF4)；培養(yǎng)C2C12細胞，采用BMP2誘導其向成骨細胞

2、分化，觀察LV-ATF4感染對細胞增殖和凋亡的影響；將C3H10細胞進行高密度微團培養(yǎng)，采用BMP2誘導其向軟骨細胞分化，分別在BMP2誘導不同時間階段，檢測LV-ATF4對軟骨細胞分化中增殖凋亡的影響；手術建立小鼠骨折和骨缺損模型，分析PGRN-/-小鼠與野生型小鼠骨損傷后愈合狀況及ER Stress相關分子的表達變化。
　　結果:成功構建和包裝滴度為1×108efu/mL的ATF4重組慢病毒；在BMP2誘導C2C12向成骨細胞

3、分化過程中，感染LV-ATF4能加速細胞的凋亡，抑制細胞增殖和分化；在BMP2誘導C3H10軟骨細胞分化過程中，感染LV-ATF4促進細胞的凋亡；成功建立野生型小鼠與PGRN-/-小鼠的骨折和骨缺損模型，與野生型小鼠相比，PGRN-/-小鼠骨損傷后愈合程度下降，ER stress相關分子表達下降。
　　結論:ATF4基因過表達可以促進BMP2誘導C2C12成骨細胞分化過程中細胞的凋亡、抑制細胞增殖和分化；同時促進BMP2誘導C3H