LV-PERK慢病毒對軟骨細胞凋亡的研究及PGRN---小鼠關節(jié)炎模型的建立.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：構建人蛋白激酶R樣內質網(wǎng)激酶(Protein Kinase R-like ERkinase，PERK)慢病毒載體并包裝慢病毒顆粒(Lentivirus)，探討軟骨細胞中PERK基因慢病毒修飾對內質網(wǎng)應激介導凋亡的作用;同時建立雞Ⅱ型膠原誘導PGRN-/-小鼠的關節(jié)炎模型。
　　方法：應用慢病毒載體系統(tǒng)pWPT-GFP-PERK與慢病毒包裝質粒pMD2G、pSPAX2共轉入293T細胞中，進一步包裝形成PERK慢病毒(LV-P

2、ERK)（詳見第一部分）;培養(yǎng)成肌細胞C2C12，用衣霉素（tunicamycin，TM）誘導內質網(wǎng)應激(ER Sress)，觀察PERK在ER Sress狀態(tài)下對C2C12細胞增殖與凋亡的影響（詳見第二部分）;并將C3H10及ATDC5細胞微團培養(yǎng)，在BMP2誘導不同時間點分別感染LV-PERK、LV-GFP，檢測其對軟骨分化過程中凋亡的影響（詳見第三部分）;將雞Ⅱ型膠原(COLII)與弗氏完全佐劑(FCA)等體積混合后通過尾部皮下注

3、射PGRN-/-小鼠，3周后進行等量注射同樣的COLII，觀察PGRN-/-小鼠是否出現(xiàn)炎癥性關節(jié)炎的相關癥狀（詳見第三部分）。
　　結果：成功構建和包裝了人PERK重組慢病毒;在TM誘導內質網(wǎng)應激的狀態(tài)下，PERK能加速細胞的凋亡;在BMP2誘導軟骨細胞C3H10及ATDC5分化的過程下，PERK能減少分化過程中軟骨細胞的凋亡。成功建立雞Ⅱ型膠原誘導的PGRN-/-小鼠關節(jié)炎模型。
　　結論：在內質網(wǎng)應激的狀態(tài)下，PERK

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