益氣養(yǎng)陰清熱利濕方對IgA腎病大鼠腎臟的保護作用及其對MMP-9-TIMP-1的影響.pdf

1、目的:通過觀察益氣養(yǎng)陰清熱利濕方對IgA腎病模型大鼠24小時尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮、血清白蛋白及腎組織中基質(zhì)金屬蛋白酶-9和金屬蛋白酶組織抑制物-1表達水平的影響，探討該中藥方對IgA腎病的腎臟保護作用及其可能的作用機制，為臨床上治療IgA腎病提供實驗依據(jù)。
　　方法:健康雄性清潔級SD大鼠40只隨機分為正常對照組、模型組、貝那普利組及中藥組，每組各10只。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，除正常對照組大鼠外，均給予牛血清白蛋白400 mg/

2、kg隔日灌胃6周;每周皮下注射蓖麻油0.5 ml+四氯化碳0.1ml1次，共9周;第6、8周末尾靜脈注射脂多糖0.05 mg復(fù)制IgA腎病大鼠模型。正常對照組大鼠予以等量(4 ml/kg)的蒸餾水隔天灌胃，共持續(xù)6周;皮下注射蓖麻油0.6 ml，每周1次，共持續(xù)9周;于第6、8周尾靜脈注射氯化鈉溶液0.2 ml。于實驗開始后第10周給予中藥組大鼠益氣養(yǎng)陰清熱利濕中藥(15.75 g/kg/d)灌胃，給予貝那普利組大鼠鹽酸貝那普利片(1.

3、05 mg/kg/d)灌胃，正常對照組、模型組實驗大鼠均灌服等量蒸餾水，連續(xù)灌胃8周。分別于造模前、第7周、9周、13周、17周末收集各組大鼠24h尿液，檢測24h尿蛋白定量。17周末用水合氯醛麻醉大鼠，股動脈取血，離心，檢測血清Scr、BUN、ALB含量，留取腎臟組織，行HE、PASM染色及免疫熒光檢查，觀察大鼠腎小球的病理變化，免疫組化及聚合酶鏈式反應(yīng)測定腎組織中MMP-9、TIMP-1水平。
　　結(jié)果:
　　1同一時期

4、各組實驗大鼠24h尿蛋白定量的比較
　　造模前，正常對照組、模型組、貝那普利組、中藥組實驗大鼠24h尿蛋白定量相比均無顯著性差異（P＞0.05）。
　　第7周末，模型組、貝那普利組、中藥組實驗大鼠24h尿蛋白定量與正常對照組相比均明顯升高（P＜0.05）;模型組、貝那普利組、中藥組實驗大鼠24h尿蛋白定量相比無顯著性差異(P＞0.05)。
　　第9周末，模型組、貝那普利組、中藥組實驗大鼠24h尿蛋白定量與正常對照組相比

5、均明顯升高(P＜0.05);模型組、貝那普利組、中藥組實驗大鼠24h尿蛋白定量相比無顯著性差異(P＞0.05)。
　　第13周末，模型組、貝那普利組、中藥組實驗大鼠24h尿蛋白定量與正常對照組相比均明顯升高(P＜0.05);貝那普利組、中藥組實驗大鼠24h尿蛋白定量與模型組相比降低(P＜0.05);貝那普利組、中藥組實驗大鼠24h尿蛋白定量相比無明顯差異(P＞0.05）。
　　第17周末，模型組、貝那普利組、中藥組實驗大鼠2

6、4h尿蛋白定量與正常對照組相比均明顯升高(P＜0.05);貝那普利組、中藥組實驗大鼠24h尿蛋白定量與模型組相比降低(P＜0.05);貝那普利組、中藥組實驗大鼠24h尿蛋白定量比較無明顯差異(P＞0.05）。
　　2益氣養(yǎng)陰清利濕熱方對實驗IgAN大鼠Scr、BUN、ALB的影響
　　正常對照組、模型組、貝那普利組、中藥組血清Scr、BUN、ALB比較:各組間差異均不明顯(P＞0.05)。
　　3腎臟病理形態(tài)學(xué)觀察

7、r>　　3.1光學(xué)顯微鏡觀察
　　正常對照組實驗大鼠腎小球結(jié)構(gòu)完整，腎小球系膜、基質(zhì)未見明顯異常改變;模型組大鼠腎小球系膜細胞增殖、系膜基質(zhì)積聚，部分腎小球囊腔粘連，腎小球毛細血管管腔擠壓變窄;貝那普利組、中藥組大鼠腎小球系膜細胞輕度增生和系膜基質(zhì)增寬，與模型組相比，病變減輕。
　　3.2免疫熒光觀察
　　正常對照組實驗大鼠腎小球系膜區(qū)無免疫復(fù)合物沉積，模型組可見腎小球系膜區(qū)顆粒狀或團塊狀熒光綠色免疫復(fù)合物沉積，貝那普

8、利組、中藥組大鼠腎小球系膜區(qū)也有免疫復(fù)合物不同程度的沉積，但較模型組輕。
　　4免疫組織化學(xué)方法檢測實驗IgAN大鼠腎臟組織中MMP-9和TIMP-1的表達
　　正常對照組實驗大鼠腎臟MMP-9陽性表達;與正常對照組比較，模型組、貝那普利組和中藥組實驗大鼠腎臟MMP-9表達明顯降低（P＜0.05）;與模型組相比，兩治療組均升高（P＜0.05）;兩治療組之間無明顯差異(P＞0.05)。
　　正常對照組實驗大鼠腎臟TIMP

9、-1少量表達;與正常對照組相比，模型組及各治療組TIMP-1表達均明顯增高（P＜0.05）;與模型組相比，各治療組TIMP-1表達均降低（P＜0.05）;兩治療組之間無明顯差異(P＞0.05)。
　　5 RT-PCR方法檢測實驗IgAN大鼠腎臟組織中MMP-9 mRNA和TIMP-1mRNA的表達
　　與正常對照組相比，模型組及各治療組均明顯MMP-9 mRNA水平明顯降低(P＜0.05);與模型組比較，各治療組MMP-9

10、mRNA表達均升高(P＜0.05），且治療組之間MMP-9 mRNA表達無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　與正常對照組相比，模型組及各治療組TIMP-1mRNA表達均明顯增高(P＜0.05）;與模型組相比，各治療組TIMP-1 mRNA表達均明顯降低(P＜0.05)，兩治療組間無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1益氣養(yǎng)陰清熱利濕方能明顯降低IgA腎病實驗大鼠24小時尿蛋白定量，此療效與鹽酸貝那普利相當(dāng)。