益氣養(yǎng)陰消癥通絡(luò)中藥對糖尿病腎病大鼠腎臟的保護作用及對MMP-9-TIMP-1影響的實驗研究.pdf

1、目的:糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病全身性微血管病變表現(xiàn)之一,是糖尿病常見的并發(fā)癥,臨床上主要表現(xiàn)為蛋白尿、漸進性腎功能損害、水腫、高血壓、晚期出現(xiàn)腎功能衰竭,是糖尿病患者的主要死亡原因之一。其病理改變主要為腎臟肥大,’腎小管及腎小球基底膜(glomerular basement mernbrane,GBM)增厚,系膜細胞增生,細胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)積聚致系膜

2、區(qū)擴張,最終導(dǎo)致彌漫性或結(jié)節(jié)性腎小球硬化及腎小管間質(zhì)纖維化[1],這些病理變化的組織學(xué)基礎(chǔ)是腎臟ECM的沉積。研究發(fā)現(xiàn),在DN的發(fā)生和發(fā)展過程中,基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)及其組織抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMPs)調(diào)控ECM的生成和降解,在ECM代謝中起重要作用。MMPs/TIMPs系統(tǒng)失衡導(dǎo)致ECM過度積聚,從而使腎小球

3、系膜區(qū)基質(zhì)增生及基底膜增厚,因此,通過調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶系統(tǒng),對于減少ECM積聚,防止及延緩腎小球硬化有重要意義。
　　 目前DN的防治尚缺乏的有效的治療措施,而中醫(yī)中藥以其多靶點的整體調(diào)節(jié)和以人為本的個體化治療方案,在DN的臨床防治中具有很大的潛力。導(dǎo)師陳志強教授根據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)理論并結(jié)合臨床實踐,提出氣陰兩虛、瘀血阻絡(luò)、癥瘕易生的DN基本病機,以益氣養(yǎng)陰,消癥通絡(luò)中藥為基本方,臨床療效確切,并且前期研究已確切證實,本方在抗氧化應(yīng)

4、激、足細胞保護、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的等方面的影響,本研究以MMPs/TIMPs系統(tǒng)為切入點,旨在進一步探討本方對DN發(fā)生發(fā)展的影響及其可能作用機制。
　　 方法:健康雄性SD大鼠90只,體重200g±10g,適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后,經(jīng)背部切口行左腎切除術(shù)。2周后除腎切組(10只)外,其余大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)(40mg/kg),72小時候后尾靜脈取血,測血糖連續(xù)3次≥16.7mmol/L為造模成功,按

5、造模成功的大鼠數(shù)量隨機均等分為5組:模型組、厄貝沙坦組、中藥低劑量組、中劑量組、高劑量組。厄貝沙坦組大鼠給予厄貝沙坦15mg/kg/d灌胃,中藥低、中、高劑量組大鼠分別給予中藥5.29g/kg/d、10.58g/kg/d、21.16g/kg/d灌胃,余組給予相當(dāng)劑量生理鹽水灌胃,共給藥12周。于給藥第12周末,收集24h尿液,股動脈取血,處死大鼠,分離皮髓質(zhì),檢測各組大鼠24h尿蛋白定量,腎功能,光鏡、電鏡下觀察各組大鼠腎臟的病理改變,

6、應(yīng)用RT-PCR方法檢測各組大鼠腎皮質(zhì)MMP-9/TIMP-1的基因表達。
　　 結(jié)果:
　　 1:各組大鼠體重、肥大指數(shù)(腎重/體重)與正常組相比,模型組及各治療組體重明顯減輕(P＜0.05);與模型組相比,各治療組體重明顯增加(P＜0.05);各治療組之間體重?zé)o明顯差異(P＞0.05)。正常組、模型組及各治療組之間比較大鼠右腎重?zé)o顯著性差異(P＞0.05);與正常組相比,模型組及各治療組肥大指數(shù)顯著增高(P＜0.05

7、),與模型組相比,各治療組肥大指數(shù)明顯偏低(P＜0.05),各治療組之間肥大指數(shù)無明顯差異(P＞0.05)。
　　 2:各組大鼠24小時尿蛋白定量與正常組比較,模型組及各治療組尿蛋白(urine protein,Upro)升高(P＜0.05);與模型組比較:各治療組Upro下降(P＜0.05);與中藥高劑量組相比,厄貝沙坦、中藥低劑量組Upro下降(P＜0.05);厄貝沙坦、中藥低劑量組之間比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

8、r>　　 3:各組大鼠腎功能與正常組相比,模型組及各治療組血肌酐(serumcreatinine,Scr)均明顯增高(P＜0.05);與模型組相比,各治療組明顯降低(P＜0.05);與中藥高劑量組相比,厄貝沙坦、中藥低、中劑量組明顯降低(P＜0.05);厄貝沙坦、中藥低、中劑量組之間無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。對于血尿素氮(bloodureanitrogen,BUN),與正常組相比,模型組及各治療組均明顯增高(P＜0.05);與模型

9、組相比,各治療組均明顯降低(P＜0.05);各治療組間無明顯差異(P＞0.05)。
　　 4:腎臟病理形態(tài)學(xué)觀察
　　 4.1:光鏡觀察正常組大鼠腎臟腎小球正常大小,毛細血管基底膜無增厚,系膜細胞數(shù)≤3個,基質(zhì)分布面積大小正常,腎小管間質(zhì)無明顯病理改變。模型組大鼠腎臟腎小球明顯肥大,毛細血管基底膜增厚,系膜細胞增長不明顯,系膜區(qū)顯著增寬。厄貝沙坦、中藥各劑量組以上病理改變較模型組為輕,各治療組間差異不明顯。
　　

10、 4.2:電鏡觀察正常組腎小球毛細血管內(nèi)皮細胞未見異常,基底膜結(jié)構(gòu)完整,足突未見融合、缺如等異常改變;模型組腎小球系膜細胞增生不明顯,系膜基質(zhì)增多,毛細血管基底膜增厚,伴有足細胞足突融合;中藥組與厄貝沙坦組也均有不同程度的病理改變,但較模型組輕,各組間無明顯差別。
　　 5:各組大鼠腎皮質(zhì)MMP-9及TIMP-1的基因表達
　　 5.1:MMP-9 mRNA的檢測與正常組相比,模型組及各治療組MMP-9 mRNA均明顯降

11、低(P＜0.05);與模型組比較,各治療組MMP-9 mRNA表達均升高(P＜0.05),各治療組之間MMP-9 mRNA表達無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 5.2: TIMP-1 mRNA的檢測與正常組相比,模型組及各治療組TIMP-1mRNA表達均明顯增高(P＜0.05);與模型組相比,各治療組TIMP-1mRNA表達均明顯降低(P＜0.05);與中藥高劑量組相比,厄貝沙坦、中藥低劑量組TIMP-1mRNA表達均明顯降

12、低(P＜0.05);厄貝沙坦、中藥低劑量組之間相比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1:益氣養(yǎng)陰消癥通絡(luò)中藥可降低DN大鼠血肌酐及尿素氮,減少尿蛋白的排泄,延緩DN的進展。
　　 2:益氣養(yǎng)陰消癥通絡(luò)中藥可以有效抑制系膜基質(zhì)的增生及基底膜的增厚和足細胞的融合,延緩腎臟病理進展。
　　 3:益氣養(yǎng)陰消癥通絡(luò)中藥能夠提高糖尿病腎病大鼠腎組織MMP-9mRNA表達,降低TIMP-1mRNA表