益氣養(yǎng)陰化痰通絡(luò)中藥對(duì)糖尿病性脂肪肝大鼠肝臟的治療作用.pdf

1、目的:糖尿病性脂肪肝(Diabetic Fatty Liver,DFL)是指在糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)基礎(chǔ)上出現(xiàn)的肝細(xì)胞的脂肪變性,臨床上可將其歸屬于非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic Fatty Liver Disease,NAFLD)的范疇。“二次打擊”學(xué)說認(rèn)為在NAFLD發(fā)生過程中,胰島素抵抗(Insulin Resistance,IR)和脂代謝紊亂是第一次打擊,導(dǎo)致肝臟對(duì)多種損傷因素敏感;氧化

2、應(yīng)激、脂質(zhì)過氧化及各種損傷因子是第二次打擊,導(dǎo)致肝臟進(jìn)一步發(fā)生變性、炎癥、壞死及纖維化。二次打擊在DFL的發(fā)病過程中表現(xiàn)得尤為突出。本研究通過對(duì)SD大鼠采用高脂飲食聯(lián)合腹腔注射中劑量鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)的方法建立DFL模型,應(yīng)用益氣養(yǎng)陰化痰通絡(luò)中藥復(fù)方對(duì)該模型進(jìn)行干預(yù),通過觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般情況、肝指數(shù)、肝臟病理形態(tài)學(xué)、血清甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)的含量、肝組織丙二醛(MDA)

3、水平、肝組織總超氧化物歧化酶(T-SOD)活力、血清脂聯(lián)素水平,肝組織脂聯(lián)素(Adiponectin)及其受體2(Adiponectin Receptor2,AdiR2)水平,探討益氣養(yǎng)陰化痰通絡(luò)中藥復(fù)方對(duì)DFL的治療作用及其可能的作用機(jī)制,為臨床上治療以氣陰兩虛痰瘀阻絡(luò)為基本病因病機(jī)的消渴提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:
　　 清潔級(jí)健康雄性SD大鼠75只,體重240～260g,適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,按體重隨機(jī)分為正常組12只

4、、模型組18只、益氣養(yǎng)陰化痰通絡(luò)中藥低劑量組、中劑量組、高劑量組每組各15只。除正常組給予普通飼料喂養(yǎng)外,其余各組大鼠均給予高脂飼料喂養(yǎng)。喂養(yǎng)4周后,除正常組外,其余各組大鼠一次性腹腔注射STZ35mg·kg-1,正常組腹腔注射相當(dāng)劑量枸櫞酸緩沖液,72小時(shí)后連續(xù)3次尾靜脈取血測(cè)血糖,以≥16.7mmol·L-1為DM模型造模成功標(biāo)準(zhǔn)。造模成功后,益氣養(yǎng)陰化痰通絡(luò)中藥低、中、高劑量組大鼠分別給予中藥5.29g·kg-1·d-1、10.5

5、8g·kg-1·d-1、21.16g·kg-1·d-1灌胃,正常組及模型組給予相當(dāng)劑量的生理鹽水灌胃,每日一次,共8周。于用藥后第8周末,禁食12h,麻醉狀態(tài)下稱量體重,股動(dòng)脈取血,分離血清,測(cè)定TG、TC、HDL,ELISA方法檢測(cè)血清.Adiponectin水平;摘取肝臟,稱量肝臟重量計(jì)算肝指數(shù),留取肝組織置于4％多聚甲醛固定液,光鏡下觀察各組大鼠肝臟病理形態(tài)學(xué)變化;留取肝組織液氮速凍后置-80℃低溫冰箱保存,用于檢測(cè)肝組織中MDA

6、含量、T-SOD活力,RT-PCR方法檢測(cè)肝臟組織中Adiponectin含量,Western blot方法檢測(cè)肝臟AdiR2的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1：實(shí)驗(yàn)大鼠的一般狀況實(shí)驗(yàn)過程中除正常組外,其余四組均有死亡情況,其中模型組死亡4只,中藥高劑量組死亡2只,中、低劑量組死亡各1只,死亡原因可能與高血糖引起的酮癥酸中毒及各臟器功能紊亂有關(guān)。正常組大鼠體重呈進(jìn)行性增長,飲食正常,反應(yīng)敏捷,眼光有神,毛發(fā)有光澤,糞便呈麥

7、粒樣,尿量正常。其余各造模組大鼠腹腔注射STZ后,出現(xiàn)明顯的多飲多尿現(xiàn)象,并逐漸出現(xiàn)精神萎靡,反應(yīng)遲鈍,眼光呆滯,毛發(fā)無光澤,糞便時(shí)而不成形。
　　 2：各組大鼠體重、肝重、肝指數(shù)(肝濕重/體重×100％)結(jié)果顯示:各組大鼠體重與肝濕重,與正常組相比,模型組、中藥低、中、高劑量組大鼠體重、肝濕重明顯升高(P≤0.05);與模型組相比,中藥各劑量組體重、肝濕重明顯降低(P＜0.05);各中藥治療組之間無顯著性差異(P＞0.05);

8、各組大鼠肝指數(shù),與正常組相比,模型組、中藥低、中、高劑量組大鼠肝指數(shù)明顯升高(P＜0.05);與模型組相比,中藥各劑量組肝指數(shù)明顯降低(P＜0.05);各中藥治療組之間無顯著性差異(P＞0.05)。提示,益氣養(yǎng)陰化痰通絡(luò)中藥可明顯降低DFL大鼠體重、肝濕重及肝指數(shù),減輕肝臟的脂肪變性。
　　 3：各組大鼠肝臟病理形態(tài)學(xué)改變正常組大鼠肝小葉完整,界限清晰,肝細(xì)胞圍繞中央靜脈呈放射狀排列,其中央有大而圓的細(xì)胞核,細(xì)胞質(zhì)均勻,偶可見小

9、脂滴,肝竇清晰可見,肝索排列整齊;模型組大鼠肝小葉界限不清,肝細(xì)胞脂肪變性腫脹,肝細(xì)胞內(nèi)含有大小不等的脂肪滴,將肝細(xì)胞核擠向一側(cè),肝竇間隙明顯變窄,局部可見纖維組織增生,延伸向肝小葉內(nèi)部,肝索排列紊亂;益氣養(yǎng)陰化痰通絡(luò)中藥各治療組肝小葉結(jié)構(gòu)清晰,肝竇輕度擴(kuò)張,結(jié)構(gòu)較正常,部分肝細(xì)胞脂肪變性,肝細(xì)胞內(nèi)脂肪滴較模型組明顯減少,多以小脂滴存在,肝索排列較整齊。提示,益氣養(yǎng)陰化痰通絡(luò)中藥可改善DFL大鼠肝臟脂肪變性。
　　 4：各組大鼠

10、血清TG、TC、HDL含量各組大鼠血清TG含量結(jié)果顯示:與正常組相比,模型組、中藥低、中、高劑量組大鼠血清TG明顯升高(P＜0.05);與模型組相比,中藥各劑量組血清TG明顯降低(P＜0.05);中劑量組與高、低劑量相比明顯降低(P＜0.05),中藥高劑量組和低劑量組之間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 各組大鼠血清TC含量結(jié)果顯示:與正常組相比,模型組、中藥低、中、高劑量組大鼠血清TC明顯升高(P＜0.05);與模型組相比

11、,中藥各組血清TC明顯降低(P＜0.05);中藥各組間比較,中劑量組與高、低劑量相比明顯降低(P＜0.05),中藥高劑量組和低劑量組之間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 各組大鼠血清HDL,含量結(jié)果顯示:與正常組相比,模型組、中藥低、中、高劑量組大鼠血清HDL明顯降低(P＜0.05);與模型組相比,中藥各組血清HDL明顯升高(P＜0.05);中藥各組間比較,中劑量組與高、低劑量相比明顯升高(P＜0.05),中藥高劑量組和低劑

12、量組之間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 以上結(jié)果提示,益氣養(yǎng)陰化痰通絡(luò)中藥可明顯降低DFL大鼠血清TG、TC含量,升高血清HDL含量,此可能為其治療DFL的機(jī)制之一。
　　 5：各組大鼠肝臟組織MDA含量及T-SOD活力各組大鼠肝組織MDA含量結(jié)果顯示:與正常組相比,模型組、中藥低、中、高劑量組明顯升高(P＜0.05);與模型組相比,中藥各劑量組明顯降低(P＜0.05);中藥各組間比較,高劑量組與低、中劑量相比明顯

13、升高(P＜0.05),中藥低劑量組和中劑量組之間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 各組大鼠肝組織T-SOD活力結(jié)果顯示:與正常組相比,模型組、中藥低、中、高劑量組明顯降低(P＜0.05);與模型組相比,中藥各劑量組明顯升高(P＜0.05);中藥各劑量組之間比較,高劑量組與低、中劑量相比明顯降低(P＜0.05),中藥低劑量組和中劑量組之間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 提示,益氣養(yǎng)陰化痰通絡(luò)中藥可明顯降低DFL大

14、鼠肝臟組織中MDA含量并且提高T-SOD活力,明顯改善DFL大鼠肝臟抗氧化能力,此可能為其治療DFL的機(jī)制之一。
　　 6：各組大鼠血清Adiponectin、肝組織Adiponectin及AdiR2的水平各組大鼠血清Adiponectin水平比較,結(jié)果顯示:與正常組相比,模型組、中藥低、中、高劑量組明顯降低(P＜0.05);與模型組相比,中藥各劑量組明顯升高(P＜0.05);中藥各組間比較,高劑量組與低、中劑量相比明顯降低(P

15、＜0.05),中藥低劑量組和中劑量組之間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 大鼠肝臟Adiponectin水平比較,正常組、模型組及中藥各治療組之間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 各組大鼠肝組織AdiR2水平比較,結(jié)果顯示:與正常組相比,模型組、中藥低、中、高劑量組明顯降低(P＜0.05);與模型組相比,中藥各劑量組明顯升高(P＜0.05);中藥各組間比較,中劑量組較高、低劑量明顯升高(P＜0.05),中藥高劑量

16、組和低劑量組之間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 以上結(jié)果顯示,益氣養(yǎng)陰化痰通絡(luò)中藥可明顯提高DFL大鼠血清Adiponectin水平和肝臟AdiR2水平,但對(duì)肝臟Adiponectin的水平影響不明顯,提示本方對(duì)DFL的治療作用可能與提高DFL大鼠血清Adiponectin水平和肝臟AdiR2水平有關(guān),而與其對(duì)肝臟Adiponectin水平的影響無關(guān)。
　　 結(jié)論:
　　 1：益氣養(yǎng)陰化痰通絡(luò)中藥可明顯改善

17、DFL大鼠肝臟脂肪變性,降低肝指數(shù),對(duì)于DFL有良好的治療作用。
　　 2：益氣養(yǎng)陰化痰通絡(luò)中藥可明顯降低DFL大鼠的血清TG及TC,升高血清HDL含量,提示其對(duì)DFL的治療作用與調(diào)節(jié)血脂有關(guān)。
　　 3：益氣養(yǎng)陰化痰通絡(luò)中藥可明顯提高DFL大鼠肝臟抗氧化能力,延緩“二次打擊”學(xué)說中的第二次打擊,即脂質(zhì)過氧化,起到防止肝臟進(jìn)一步變性、壞死及纖維化的作用,此可能為本中藥復(fù)方治療DFL的作用機(jī)制之一。
　　 4：益氣