鹽酸多西環(huán)素對哮喘大鼠MMP-9-TIMP-1平衡及TGF-β1的影響.pdf

1、目的:觀察多西環(huán)素對哮喘大鼠MMP-9/TIMP-1平衡及TGF-β1的影響。建立大鼠哮喘模型，通過觀察多西環(huán)素干預后肺組織中MMP-9、TIMP-1表達及血清中TGF-β1濃度的變化，探討多西環(huán)素對哮喘氣道重塑和氣道炎癥的影響及其作用機制，為哮喘的臨床治療提供新的途徑。
　　 方法:SD健康雄性大鼠33只，6周齡，體重在50-100g之間，隨機分為3組，即正常對照組、哮喘模型組、多西環(huán)素干預組，每組11只。哮喘模型組和多西環(huán)素

2、干預組大鼠分別于實驗第1、8天腹腔注射卵清蛋白100mg和氫氧化鋁100mg（混于0.9％氯化鈉溶液中）配成的混合溶液2ml進行致敏。第15天起將大鼠置于自制的非完全密閉的霧化箱中吸入卵清蛋白溶液進行激發(fā)試驗，每次30分鐘，隔日一次，共激發(fā)20次。卵蛋白溶液濃度按照1％、1.5％、2％、2.5％、3％依次遞增，每4次激發(fā)后調整一次。對照組以等量生理鹽水替代卵蛋白激發(fā)，方法同上。多西環(huán)素干預組在每次激發(fā)前0.5小時灌胃給藥，劑量為30mg

3、/kg。末次激發(fā)24小時后1％戊巴比妥鈉麻醉、處死大鼠，取各組大鼠支氣管肺泡灌洗液、血清及肺組織。測定肺泡灌洗液中細胞總數和中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、淋巴細胞的數量，ELISA法檢測血清中TGF-β1濃度，免疫組化檢測各組大鼠肺組織中MMP-9、TIMP-1的表達。部分肺組織行蘇木精—伊紅染色，觀察其形態(tài)學變化，應用計算機圖像分析技術測定肺組織支氣管基底膜周徑、總管壁面積、平滑肌面積，應用圖像分析軟件測定MMP-9、TIMP-1的相對表

4、達強度。
　　 結果:
　　 1、哮喘模型的建立
　　 應用卵蛋白致敏和反復激發(fā)的方法成功建立了大鼠哮喘模型。激發(fā)過程中哮喘組大鼠可有呼吸急促、煩躁不安等表現;實驗期間出現精神萎靡、反應遲鈍、體重減輕等情況。
　　 2、肺泡灌洗液細胞計數（106/L）及分類哮喘組細胞總數（35.53±7.06）明顯高于正常對照組（9.42±3.67）(P＜0.05)和多西環(huán)素干預組（14.65±5.81）(P＜0.01)

5、;多西環(huán)素組較正常對照組亦有所升高(P＜0.01);三組之間存在顯著性差異，具有統(tǒng)計學意義（F=64.840，P＜0.01）。
　　 哮喘組嗜酸性粒細胞（4.83±0.65）明顯高于正常對照組（1.24±0.72）(P＜0.05)和多西環(huán)素干預組（2.14±0.58）(P＜0.01);多西環(huán)素組較正常對照組亦有所升高(P＜0.01);三組之間存在顯著性差異，具有統(tǒng)計學意義（F=90.598，P＜0.01）。
　　 哮喘組

6、中性粒細胞（1.12±0.30）明顯高于正常對照組（0.23±0.14）(P＜0.05)和多西環(huán)素干預組（0.59±0.19）(P＜0.01);多西環(huán)素組較正常對照組亦有所升高(P＜0.01);三組之間存在顯著性差異，具有統(tǒng)計學意義(F=45.007，P＜0.01)。
　　 哮喘組淋巴細胞（2.63±0.33）明顯高于正常對照組（1.18±0.38）(P＜0.05)和多西環(huán)素干預組（2.05±0.58）（P＜0.01）;多西環(huán)素

7、組較正常對照組亦有所升高(P＜0.01);三組之間存在顯著性差異，具有統(tǒng)計學意義(F=90.598，P＜0.01)。
　　 3、氣道管壁厚度(μm2/μm)、平滑肌厚度(μm2/μm)
　　 分析比較各組大鼠氣道管壁厚度、平滑肌厚度結果顯示:哮喘組（109.95±13.85）、（56.94±8.23），顯著高于多西環(huán)素干預組（86.37±5.85）、（40.64±4.53）（P＜0.01，P＜0.01）和正常對照組（65

8、.47±7.22）、（20.09±6.09）(P＜0.01，P＜0.01);多西環(huán)素組較正常對照組亦明顯升高(P＜0.01);三組之間存在顯著性差異，具有統(tǒng)計學意義(F=58.737，P＜0.01)、(F=89.782，P＜0.01)。
　　 4、MMP-9、TIMP-1的表達及MMP-9/TIMP-1
　　 MMP-9:哮喘組（0.52±0.06）明顯高于正常對照組（0.24±0.06）(P＜0.01)和多西環(huán)素干預組

9、（0.39±0.06）(P＜0.01);多西環(huán)素組較正常對照組仍有所升高(P＜0.01);三組之間存在顯著性差異，具有統(tǒng)計學意義（F=57.966，P＜0.01）。
　　 TIMP-1:哮喘組（0.62±0.06）明顯高于正常對照組（0.24±0.06）(P＜0.01)和多西環(huán)素干預組（0.41±0.07）(P＜0.01);多西環(huán)素組較正常對照組仍有所升高(P＜0.01);三組之間存在顯著性差異，具有統(tǒng)計學意義(F=102.49

10、6，P＜0.01)。
　　 MMP-9/TIMP-1:哮喘組（0.83±0.04）低于正常對照組（1.02±0.04）(P＜0.01)和多西環(huán)素干預組(0.94±0.06)(P＜0.01);多西環(huán)素組亦低于正常對照組(P＜0.01);三組之間存在顯著性差異，具有統(tǒng)計學意義(F=41.839，P＜0.01)。
　　 5、各組大鼠血清TGF-β1的檢測(ng/ml)
　　 哮喘組（27.66±4.01）較正常對照組（

11、13.15±2.01）(P＜0.01)和多西環(huán)素干預組(18.39±2.88)(P＜0.01)顯著升高，多西環(huán)素組較正常對照組仍有所升高(P＜0.01);三組之間存在顯著性差異，具有統(tǒng)計學意義(F=62.632，P＜0.01)。
　　 6、相關分析研究
　　 結果顯示MMP-9與TIMP-1（r=0.93，P＜0.01）及TGF-β1(r=0.81，P＜0.01)均為正相關;MMP-9與氣管壁厚度正相關(r=0.82，P

12、＜0.01);TGF-β1與平滑肌厚度正相關（r=0.79，P＜0.01），MMP-9/TIMP-1與氣管壁厚度負相關(r=-0.77，P＜0.01)。
　　 結論:多西環(huán)素可減少肺泡灌洗液中炎性細胞的數量，從而減輕氣道炎癥;多西環(huán)素可下調MMP-9、TIMP-1表達及TGF-β1的濃度，從而減緩氣道重塑。通過對MMP-9/TIMP-1平衡及TGF-β1濃度的調節(jié)，多西環(huán)素減緩哮喘的氣道炎癥和氣道重塑，這成為其治療哮喘的重要機制