益氣養(yǎng)陰活血方對糖尿病大鼠腎臟的保護及腎組織基質金屬蛋白酶-9表達的影響.pdf

1、糖尿病腎病(diabetic nephropathy, DN)是糖尿病微血管并發(fā)癥之一，是導致終末期腎病的主要原因。積極防治早期糖尿病腎病對延緩病程進展意義重大。導師張庚良教授根據(jù)多年臨床經(jīng)驗總結的益氣養(yǎng)陰活血方，具有保護腎臟、防治糖尿病腎病進展的作用。
　　目的:
　　本實驗通過腹腔注射鏈脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型，之后給予藥物干預，觀察益氣養(yǎng)陰活血方對糖尿病大鼠的血糖、血脂、腎功能、24h尿白蛋白排泄率、腎臟肥大指數(shù)和腎

2、臟組織基質金屬蛋白酶-9表達的影響，探討本方保護腎臟的作用機理。
　　方法:
　　選用清潔級健康雄性Wistar大鼠60只，體重約230-250g，普通飼料適應性喂養(yǎng)1周后，隨機選取12只作為正常對照組(N)，余下的48只用于復制糖尿病模型。以55mg/kg體重計算，一次性腹腔注射1％的鏈脲佐菌素枸櫞酸緩沖液（緩沖液濃度0.1 mmol/L，pH4.5）。正常對照組給予相同體積的1％檸檬酸緩沖液一次性腹腔注射。72小時后，取

3、大鼠尾靜脈血，測血糖數(shù)值≥16.7mmol/L，且大鼠的飲水量及尿量明顯增多，則造模成功。
　　將造模成功的48只大鼠隨機分為模型對照組(M)、中藥益氣養(yǎng)陰活血方組（簡稱中藥組，H）、西藥厄貝沙坦組（簡稱西藥組，W）、益氣養(yǎng)陰活血方聯(lián)合厄貝沙坦組（簡稱聯(lián)合組，H+W），每組12只。造模成功1周后，各治療組按成人劑量的10倍灌胃給藥。中藥組給予益氣養(yǎng)陰活血方水煎濃縮液10ml/kg（相當于32.5g/kg生藥）體重每日灌胃，西藥組給

4、予厄貝沙坦片混懸液（阿拉伯膠制）10 ml/kg（相當于2.5mg/ml原藥）體重每日灌胃。聯(lián)合組每日上午給予同等劑量的中藥灌胃，每日下午給予同等劑量的厄貝沙坦灌胃。正常對照組和模型組每日給予同等體積的生理鹽水灌胃。連續(xù)灌胃8周。第8周末，用代謝籠收集24小時尿液，記錄尿總量，并測24小時尿白蛋白排泄率。末次灌胃后禁食不禁水12小時，2％戊巴比妥鈉20mg/kg體重腹腔注射麻醉，股動脈取血，檢測各組大鼠的血糖、腎功能、血脂。取雙腎制作標

5、本，用于在光鏡下觀察腎組織的病理形態(tài)改變，免疫組化法檢測MMP-9的表達情況。
　　結果:
　　1一般情況
　　正常對照組的大鼠精神狀態(tài)良好，飲食、飲水及尿量均正常，體重增長明顯，毛色光亮，活動自如。模型組大鼠精神不振，出現(xiàn)多食、多飲、多尿，形體消瘦，毛色暗黃，活動減少，反應遲緩。一些大鼠逐漸出現(xiàn)各種糖尿病的并發(fā)癥，如白內障、感染、四肢水腫等。三個治療組的大鼠一般情況與模型組相比，有一定程度的改善。模型組和厄貝沙坦組各

6、有1只大鼠因互相撕咬死亡，益氣養(yǎng)陰活血方組和聯(lián)合組分別有1只大鼠死于灌胃不當。
　　2血糖的變化
　　與正常對照組相比，模型組、中藥組、西藥組、聯(lián)合組大鼠血糖均明顯升高，有顯著性差異(P＜0.05);中藥組及聯(lián)合組有一定的降糖作用，與模型組比較血糖下降明顯，有顯著性差異(P＜0.05);西藥組與模型組比較降糖效果不明顯，無顯著性差異(P＞0.05)。
　　3血脂的變化
　　模型組、中藥組、西藥組、聯(lián)合組大鼠的血脂

7、均明顯高于正常組;中藥組和聯(lián)合組有一定的降脂效果，與模型組相比，有顯著性差異(P＜0.05);與模型組比較，西藥組無顯著性差異(P＞0.05)。
　　4腎臟肥大指數(shù)的變化
　　與正常對照組比較，模型組、中藥組、西藥組、聯(lián)合組大鼠的腎臟肥大指數(shù)升高;與模型組比較，中藥組、西藥組、聯(lián)合組的腎臟肥大指數(shù)降低，有顯著性差異(P＜0.05);與中藥組、西藥組比較，聯(lián)合組的腎臟肥大指數(shù)降低，有顯著性差異(P＜0.05)。
　　5腎

8、功能、24h尿白蛋白排泄率的變化
　　與正常對照組比較，模型組、中藥組、西藥組、聯(lián)合組的尿素氮、肌酐明顯升高，有顯著性差異(P＜0.05);與模型組相比較，中藥組、西藥組、聯(lián)合組的尿素氮、肌酐均降低，有顯著性差異（P＜0.05）;與中藥組、西藥組比較，聯(lián)合組的尿素氮、肌酐降低，有顯著性差異(P＜0.05)。
　　與正常對照組比較，模型組的24小時尿白蛋白排泄率升高明顯，有顯著性差異(P＜0.05);與模型組相比較，三個治療組

9、的24小時尿白蛋白排泄率降低，有顯著性差異（P＜0.05）;與中藥組、西藥組比較，聯(lián)合組的24小時尿白蛋白排泄率降低，有顯著性差異(P＜0.05)。
　　6腎組織病理改變
　　正常對照組的腎小球結構完整，體積未見增大，腎小球毛細血管基底膜、系膜、基質均正常，未見異常改變。模型組的腎小球體積增大明顯，系膜基質增多。與模型組比較，三個治療組有不同程度的減輕，其中聯(lián)合組最輕。
　　7腎臟基質金屬蛋白酶-9表達的影響
　

10、　MMP-9抗原免疫組化染色為棕黃色，正常組腎組織腎小球及腎小管上皮細胞均有強陽性表達。模型組的腎小球、腎小管的MMP-9表達明顯減少，低于正常組。與模型組比較，三個治療組中MMP-9的表達有不同程度的增強(P＜0.05)，以聯(lián)合組的表達增加的最明顯。
　　結論:
　　1益氣養(yǎng)陰活血方可以降低糖尿病大鼠的血糖、血脂、肌酐、尿素氮，減少尿蛋白，有保護腎臟的作用。
　　2益氣養(yǎng)陰活血方可以上調腎組織MMP-9的表達，保護腎