吳茱萸堿對人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細胞HO-8910PM的影響.pdf

1、研究背景
　　卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見惡性腫瘤之一，其中發(fā)病率僅次于宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌，占婦科惡性腫瘤的第三位，目前其治療手段主要是手術(shù)和化療，但長期以來其5年存活率始終停留在30％，死亡率已居女性生殖系統(tǒng)腫瘤的首位。因此非常迫切的需要尋找到新的有效的抗癌藥物。吳茱萸堿是中藥吳茱萸主要生物活性成分之一，已有報道吳茱萸堿有血管舒張，抗炎及鎮(zhèn)痛等作用。另外吳茱萸堿體外能明顯抑制人前列腺癌細胞LNCaP、PC-3、人黑色素瘤細胞A375

2、-S2、人白血病細胞U937、人宮頸癌Hela細胞的生長。然而吳茱萸堿對卵巢癌細胞的作用和作用機制均不明確。
　　實驗目的：
　　研究吳茱萸堿對人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細胞HO-8910PM增殖、周期、凋亡和轉(zhuǎn)移的影響，并初步探討其作用機制。
　　實驗方法
　　1.用MTT法檢測吳茱萸堿在不同時間點對人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細胞HO-8910PM體外增殖的影響;
　　2.用流式細胞術(shù)(FCM)檢測經(jīng)吳茱萸堿處理后HO-8910

3、PM細胞的細胞周期變化;
　　3.用AnnexinⅤ/PI雙染法檢測吳茱萸堿誘導細胞凋亡的發(fā)生;
　　4.應用Transwell體外侵襲和遷移模型檢測吳茱萸堿對細胞遷移和侵襲的抑制作用;
　　5.用western blot方法分析周期、凋亡及轉(zhuǎn)移相關蛋白的變化。
　　實驗結(jié)果：
　　1.吳茱萸堿可以明顯抑制卵巢癌細胞的增殖，且呈時間依賴性和濃度依賴性。與空白對照組比較，0.625μM～10μM吳茱萸堿作用2

4、4h后，HO-8910PM細胞的生長抑制并不明顯。但在作用48h、72h和96h后，增殖抑制率非常顯著，其抑制作用呈現(xiàn)劑量依賴性和時間依賴性，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　2.吳茱萸堿將卵巢癌細胞阻滯于G2/M期。流式細胞分析術(shù)結(jié)果顯示，吳茱萸堿作用于HO-8910PM細胞24h后，各濃度組（0μM，1.25μM，2.5μM和5μM）各周期內(nèi)的細胞數(shù)量發(fā)生明顯變化，隨著藥物濃度的增加，G0/G1期細胞明顯減少而G2/M

5、期細胞逐漸增加，其差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。Western Blot實驗顯示吳茱萸堿作用24h后，CyclinB1蛋白表達水平明顯上升。
　　3.吳茱萸堿可以通過外源性死亡受體凋亡通路和內(nèi)源性線粒體凋亡通路誘導卵巢癌細胞凋亡。流式細胞分析術(shù)結(jié)果顯示，吳茱萸堿各濃度組(1.25μM，2.5μM和5μM)作用于HO-8910PM細胞48h后，凋亡細胞顯著增加，且具有藥物濃度依賴性。Western Blot實驗顯示吳茱萸堿作用2

6、4h后，HO-8910PM細胞中CleavedCaspase-3、8、9及bax表達量明顯上升，而Bcl-2表達量明顯下降。
　　4.吳茱萸堿能抑制卵巢癌細胞侵襲和遷移能力。體外遷移能力檢測結(jié)果顯示，吳茱萸堿作用于HO-8910PM細胞12h后，各濃度組（0.625μM，1.25μM和2.5μM）細胞遷移至下室的細胞數(shù)量較對照組明顯減少(P＜0.05)，并呈劑量依賴性。體外侵襲能力檢測結(jié)果顯示，吳茱萸堿作用于HO-8910PM細胞

7、24h后，各濃度組(0.625μM，1.25μM和2.5μM）穿膜細胞數(shù)較對照組有明顯減少(P＜0.05)，并呈劑量依賴性。Western Blot實驗顯示吳茱萸堿顯著抑制了HO-8910PM細胞總FAK和p-FAK表達(P＜0.05)，同時吳茱萸堿可抑制MMP-2表達(P＜0.05)，但對MMP-9無顯著影響(P＞0.05)。
　　5.吳茱萸堿可能通過PI3K/Akt和MAPKs信號通路影響卵巢癌細胞的增殖，生長和轉(zhuǎn)移。West