丙戊酸鈉對(duì)人卵巢癌HO8910細(xì)胞生長(zhǎng)作用影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究丙戊酸鈉對(duì)人卵巢癌HO8910細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，尋求卵巢癌治療的新途徑。
　　方法：體外試驗(yàn)：體外培養(yǎng)卵巢癌細(xì)胞株HO8910，分別加入含不同濃度丙戊酸鈉(濃度分別為1.0mmol/L、2.0mmol/L、3.0mmol/L、4.0mmol/L)的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)(實(shí)驗(yàn)組)，以常規(guī)培養(yǎng)的HO8910細(xì)胞株作為對(duì)照組。采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法、倒置顯微鏡技術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)(FCM)及蛋白印跡法(Westernblot)

2、分別檢測(cè)各組細(xì)胞的細(xì)胞增殖能力的變化、細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化、細(xì)胞周期及凋亡率的變化、WWOX蛋白和P27蛋白表達(dá)水平的變化。體內(nèi)試驗(yàn)：建立HO8910細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤模型，并隨機(jī)分組。實(shí)驗(yàn)組給予含0.4％丙戊酸鈉的PBS，對(duì)照組給予無(wú)菌PBS并常規(guī)飼養(yǎng)，觀察兩組裸鼠的生存時(shí)間及腫瘤生長(zhǎng)情況，并采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)、Western blot分別檢測(cè)兩組裸鼠腫瘤組織中WWOXmRNA、P27mRNA及WWOX蛋白和P27蛋白

3、表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果：(1)MTT檢測(cè)結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞各濃度的光密度(OD)值分別為：(0.793±0.031)、(0.6842±0.045)、(0.5294±0.057)、(0.3814±0.042)，與對(duì)照組細(xì)胞OD值(0.9052±0.014)相比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞隨著藥物濃度的增加，不同濃度細(xì)胞組間的OD值差異亦均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)倒置顯微鏡下觀察可見(jiàn)，對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，隨

4、著藥物濃度的增加，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞形態(tài)逐漸變圓、胞質(zhì)回縮加劇、漂浮細(xì)胞逐漸增多。(3)FCM結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組分別有(55.78±0.79)％、(59.64±0.64)％、(70.32±1.02)％、(76.34±0.96)％的細(xì)胞被阻滯于G0/G1期，與對(duì)照組細(xì)胞(50.2±0.82)％相比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞隨著藥物濃度的增加，不同濃度細(xì)胞組間的G0/G1期細(xì)胞阻滯率亦均有差異(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的凋亡

5、率分別為：(10.39±1.10)％、(29.31±1.19)％、(38.70±1.23)％、(46.96±1.37)％，與對(duì)照組細(xì)胞(4.4±1.16)％相比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞隨著藥物濃度的增加，不同濃度細(xì)胞組間的凋亡率亦均有差異(P<0.05)。(4)Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞WWOX蛋白表達(dá)水平分別為：(0.19±0.015)、(0.29±0.037)、(0.46±0.035)

6、、(0.55±0.016)，與對(duì)照組(0.13±0.032)相比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞隨著藥物濃度的增加，不同濃度細(xì)胞組間的WWOX蛋白表達(dá)水平亦均有差異(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組P27蛋白表達(dá)水平分別為：(0.18±0.028)、(0.27±0.013)、(0.36±0.032)、(0.46±0.017)與對(duì)照組(0.11±0.019)相比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞隨著藥物濃度的增加，

7、不同濃度細(xì)胞組間的P27蛋白表達(dá)水平亦均有差異(P<0.05)。(5)裸鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，實(shí)驗(yàn)組裸鼠的生存時(shí)間及腫瘤平均體積分別為：(47.12±0.73)天、(1264.59±24.83)mm3與對(duì)照組分別為：(34.58±0.46)天、(2155.62±73.38)mm3相比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組WWOX mRNA及P27mRNA的表達(dá)水平分別為：0.305±0.015、0.926±0.

8、034，其與對(duì)照組(分別為：0.193±0.056、0.702±0.047)相比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組WWOX蛋白及P27蛋白的表達(dá)水平分別為：0.46±0.065、0.394±0.018，其與對(duì)照組(分別為：0.15±0.025、0.20±0.067)相比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：丙戊酸鈉能夠抑制HO8910細(xì)胞的增殖、干擾其細(xì)胞周期并促進(jìn)HO8