凝血因子和d-二聚體檢測參考物質的評價與定值及結果一致化相關問題研究.pdf

1、目的:凝血因子Ⅷ(FⅧ)、凝血因子Ⅸ(FⅨ)和D-二聚體檢測是臨床常用的血栓與止血檢驗項目，目前國內部分實驗室FⅧ、FⅨ和D-二聚體檢測結果的準確性和可比性較差，需要研制參考物質以幫助其實施質量改進。為此，衛(wèi)生部臨床檢驗中心研制了4個批號的FⅧ和FⅨ活性檢測參考物質和5個批號的D-二聚體定量檢測參考物質，本課題對參考物質進行了評價和定值研究，同時對FⅧ、FⅨ和D-二聚體檢測的一致化相關問題進行了探討，以期為臨床實驗室實施質量改進提供幫助

2、。
　　方法:1.FⅧ和FⅨ活性檢測參考物質的評價和定值:依據(jù)ISO Guide35《標準樣品定值的一般原則和統(tǒng)計方法》，CNAS-GL03《能力驗證樣品均勻性和穩(wěn)定性評價指南》和CLSI EP-30《參考物質定值和互通性評價指南》的要求，對參考物質的均勻性、穩(wěn)定性和互通性進行評價。依據(jù)JJG1006-94《一級標準物質技術規(guī)范》和ISO Guide35《標準樣品定值的一般原則和統(tǒng)計方法》的要求，采用多家實驗室聯(lián)合定值的方式，以N

3、IBSC凝血標準品(LOT4)為溯源標準，由8家實驗室使用3種檢測系統(tǒng)(Sysmex、Stago和IL)對參考物質進行定值。
　　2.FⅧ和FⅨ活性檢測結果一致化相關問題研究:①檢測系統(tǒng)性能驗證:參照文獻及指南文件，結合廠家建議及專家意見制訂性能驗證方案，對STA-R Evolution血凝儀FⅧ和FⅨ活性檢測的性能（包括批內精密度、日間精密度、正確度和線性）進行驗證。②參考物質室內質控試應用:將參考物質應用于室內質控，計算檢測結

4、果的均值、標準差和累積變異系數(shù)(CV)，并與進口配套質控物的檢測結果進行比較，評價其室內質控應用效果。③不同系統(tǒng)檢測結果可比性及校準模式研究:依據(jù)EP9-A2，對Stago和Sysmex系統(tǒng)FⅧ和FⅨ活性檢測結果的可比性進行評價;分別以LOT4定標，高值參考物質定標和4個批號參考物質聯(lián)合定標的方式對Stago和Sysmex系統(tǒng)進行校準，比較不同校準條件下系統(tǒng)間檢測結果的可比性變化，探討最佳校準模式。
　　3.D-二聚體檢測參考物質

5、的評價和定值:依據(jù)ISO Guide35《標準樣品定值的一般原則和統(tǒng)計方法》，CNAS-GL03《能力驗證樣品均勻性和穩(wěn)定性評價指南》和CLSIEP-30《參考物質定值和互通性評價指南》的要求，對臨檢中心研制的參考物質的均勻性、穩(wěn)定性和互通性進行評價。依據(jù)JJG1006-94《一級標準物質技術規(guī)范》和ISOGuide35《標準樣品定值的一般原則和統(tǒng)計方法》的要求，采用8家實驗室聯(lián)合定值的方式，使用3種以FEU為報告單位的檢測系統(tǒng)（Sys

6、mex、Stago和Vidas）對參考物質進行定值。
　　4.D-二聚體檢測結果一致化相關問題研究:①檢測系統(tǒng)性能驗證:參照相關指南文件，結合廠家建議及專家意見制訂性能驗證方案，對Stago STA-R Evolution全自動血凝儀D-二聚體檢測的批內精密度、日間精密度和檢測線性進行驗證。②參考物質室內質控試應用:將參考物質應用于室內質控，計算檢測結果的均值、標準差和累積變異系數(shù)(CV)，并與進口配套質控物進行比較，評價其室內質

7、控應用效果。
　　結果:1.FⅧ和FⅨ活性檢測參考物質的評價和定值:各批號FⅧ和FⅨ參考物質均勻性評價單因素方差分析結果均P＞0.05，表明參考物質均勻性良好;FⅧ和FⅨ活性檢測的瓶間均勻性不確定度(ubb)分別為0.5％～2.9％和0.1％～3.9％。將參考物質置于-80℃條件下保存，在評價期限內（9個月）FⅧ和FⅨ活性檢測結果無趨勢性變化，表明參考物質穩(wěn)定性良好;其長期穩(wěn)定性不確定度(ults)分別為0.5％～5.1％和0.8

8、％～4.4％。各批號參考物質在Sysmex、Stago和IL三種檢測系統(tǒng)間均具有互通性。定值檢測結果經(jīng)離群值檢驗、等精度檢驗和正態(tài)性檢驗后，4個批號FⅧ和FⅨ活性檢測參考物質分別以8、8、8、6家和8、7、8、7家實驗室的檢測結果均值為定值結果，定值過程不確定度(uchar)分別為0.7％～2.4％和0.4％～2.4％。合成并擴展不確定度后（擴展因子k=2），4個批號參考物質FⅧ活性定值結果分別為（85±13）％、(36±4)％、（20

9、±3）％和(6±2)％，F(xiàn)Ⅸ活性定值結果分別為(102±13)％、(48±7)％、(29±4)％和(10±2)％。
　　2.FⅧ和FⅨ活性檢測結果一致化相關問題研究:①性能驗證結果顯示FⅧ和FⅨ活性檢測批內及日間精密度均在廠家要求范圍內;正確度驗證結果顯示FⅧ和FⅨ結果與靶值間的偏倚分別為-5.0％和12.7％;線性回歸方程相關系數(shù)R2均＞0.99，F(xiàn)Ⅷ活性檢測在10.3％～149.6％范圍內的線性驗證通過，F(xiàn)Ⅸ活性檢測在16.7

10、％～200.2％范圍內的線性驗證通過。②將參考物質用于室內質控，F(xiàn)Ⅷ和FⅨ活性檢測結果CV分別為3.1％～4.5％和4.3％～5.6％，均相近于商品質控物CV(6.4％～6.9％和5.0％～7.8％）。③對于Stago STA-R Evolution和Sysmex CS5100兩系統(tǒng)，比對FⅧ活性檢測結果范圍為1.3％～123.1％的40份臨床標本，結果顯示其相關性R2=0.95，以相對偏差±30％（當濃度水平＞12％時）或絕對偏差±3

11、％（當濃度水平≤12％時）為可接受標準，85％偏差結果在可接受范圍內。系統(tǒng)間的絕對偏差范圍和相對偏差分別為-3.8％～0（均值≤12％時）和-18.0％～46.8％（均值＞12％時）。比對FⅨ活性檢測結果范圍為3.4％～147.6％的37份臨床標本，結果顯示其相關性R2=0.95，84％標本偏差在可接受范圍內。系統(tǒng)間的絕對偏差范圍和相對偏差范圍為1.5％～2.6％（均值≤12％時）和當-17.6％～40.4％（均值＞12％時）。分別用L

12、OT4、高值參考物質校準和4個批號參考物質聯(lián)合校準后，F(xiàn)Ⅷ臨床標本相關性方程R2值均為0.94;相應的FⅨ臨床標本相關性方程R2值均為0.96。LOT4、高值參考物質校準和4個批號參考物質聯(lián)合校準后，F(xiàn)Ⅷ可比性允許結果數(shù)分別為95％、88％和90％，當均值≤12％時，三種校準模式下FⅧ系統(tǒng)間絕對偏差范圍分別為-3.8％～0、-5.4％～0.8％和-5.1％～1.4％，當均值＞12％時，相對偏差范圍分別為-29.9％～30.4％、-42.

13、1％～21.0％和-33.3％～21.9％。FⅨ可比性允許結果數(shù)分別為92％、95％和95％，當均值≤12％時，系統(tǒng)間的絕對偏差分別為0.1％～3.1％、-0.6％～2.3％和-0.7％～2.4％，當均值＞12％時，相對偏差范圍分別為-21.6％～36.0％、-33.1％～26.7％和-31.3％～28.5％。
　　3.D-二聚體檢測參考物質的評價和定值:D-二聚體各批號參考物質均勻性評價單因素方差分析結果均P＞0.05，表明參考

14、物質均勻性良好;其瓶間均勻性不確定度(ubb)范圍為0.001％～0.033％。將參考物質置于-80℃保存條件下，在評價期限內（11個月）D-二聚體檢測結果無趨勢性變化，表明參考物質穩(wěn)定性良好;其長期穩(wěn)定性不確定度(ults)分別為0.011％～0.104％。各批號參考物質在Sysmex、Stago和Vidas三種檢測系統(tǒng)間均具有互通性。定值檢測結果經(jīng)離群值檢驗、等精度檢驗和正態(tài)性檢驗后，5個批號D-二聚體定量檢測參考物質分別以6、6、

15、7、8和7家實驗室的檢測結果均值為定值結果，定值過程不確定度(uchar)分別為0.011％～0.096％。合成并擴展不確定度后（擴展因子k=2），5個批號參考物質定值結果分別為:(0.27±0.04) mg/L、(0.35±0.04) mg/L、(0.58±0.06) mg/L、(2.01±0.19) mg/L和(2.79±0.30) mg/L。
　　結論:1.FⅧ和FⅨ活性檢測參考物質的均勻性和穩(wěn)定性良好，在3種主流檢測系統(tǒng)間

16、具有互通性，定值結果準確可靠。
　　2.①STA-R Evolution血凝儀FⅧ和FⅨ活性檢測性能符合廠家及相關文件的要求，性能驗證方案可為其它檢測系統(tǒng)的性能驗證提供參考。②參考物質可應用于FⅧ和FⅨ活性檢測日常室內質量控制。③對于Stago STA-R Evolution和Sysmex CS5100兩系統(tǒng)，分別比對FⅧ活性檢測結果范圍為1.3％～123.1％的40份臨床標本和FⅨ活性檢測結果范圍為3.4％～147.6％的37份

17、臨床標本，F(xiàn)Ⅷ和FⅨ活性檢測結果相關性好(R2≥095)，可比性可接受（至少80％結果在允許范圍內）。使用LOT4、高值參考物質單獨校準和4個批號參考物質聯(lián)合校準后，F(xiàn)Ⅷ和FⅨ活性檢測相關性無明顯變化，可比性均提高。
　　3.D-二聚體檢測參考物質，其均勻性和穩(wěn)定性良好，在3種主流檢測系統(tǒng)間具有互通性，定值結果準確可靠。
　　4.①STA-R Evolution血凝儀的D-二聚體定量檢測性能驗證結果符合廠家及國家指南要求，性