KLF2與S1PR1對支氣管哮喘豚鼠中性粒細胞遷移的影響.pdf

1、目的：通過觀察支氣管哮喘豚鼠模型中性粒細胞中 KLF2、S1PR1的表達情況，探討KLF2與S1PR1對支氣管哮喘豚鼠中性粒細胞的遷移的影響，從而為支氣管哮喘的防治提供新的思路。
　　方法：隨機將30只豚鼠分為正常對照組、哮喘組、哮喘治療組，每組各10只；模型組及治療組通過用10％OVA及FCA致敏，1%OVA霧化激發(fā)誘導成支氣管哮喘模型，治療組在霧化激發(fā)前腹腔注射地塞米松治療，對照組用生理鹽水替代OVA與模型組同步實驗。通過觀察

2、各組豚鼠霧化激發(fā)后的癥狀變化及肺組織的病理學改變，并比較各組血及肺泡灌洗液中炎癥細胞總數及分類計數，應用肺功能檢測各組豚鼠的氣道阻力變化。分離各組豚鼠血中性粒細胞，采用 Transwell小室檢測各組血中性粒細胞遷移情況，Realtime PCR、Western-blot分別檢測各組豚鼠血中性粒細胞中KLF2、S1PR1 mRNA和蛋白的表達，ELISA檢測各組肺泡灌洗液及血清中 S1P的蛋白表達情況，免疫熒光檢測KLF2在各組豚鼠血中

3、性粒細胞內的表達及定位。
　　結果：1.支氣管哮喘動物模型的成功構建
　?。?）各組豚鼠霧化激發(fā)后體征變化的觀察：在OVA霧化激發(fā)期間發(fā)現(xiàn)哮喘組豚鼠出現(xiàn)明顯的呼吸頻率增快、前爪抓鼻、點頭呼吸、打噴嚏、咳嗽及腹肌抽搐等典型的哮喘樣癥狀，治療組豚鼠也出現(xiàn)上述癥狀但程度較哮喘組明顯減輕，正常對照組無異常反應。
　?。?）氣道阻力的測定：哮喘組豚鼠的氣道阻力隨著乙酰甲膽堿濃度的升高而增加，與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P

4、<0.01）；哮喘治療組與哮喘組比較在各濃度刺激下的氣道阻力水平下降（P<0.01）。
　?。?）肺組織的病理學觀察結果：正常對照組顯示支氣管、肺泡及肺組織結構完整，炎性細胞浸潤少；哮喘組豚鼠顯示支氣管重塑，管腔變狹窄，肺泡及肺組織結構破壞，管腔內可見較多粘液栓及粘膜皺褶增生、平滑肌細胞明顯增厚及大量炎癥細胞浸潤等典型的病理學改變，其中以中性粒細胞浸潤最明顯；治療組基底膜、平滑肌層仍有增厚，但支氣管粘膜水腫及炎性細胞浸潤明顯好轉。

5、
　?。?）各組豚鼠BALF液中細胞總數及分類計數：哮喘組豚鼠細胞總數（124.69±7.40、45.07±2.99）及NEU%（22.05±1.57、5.04±1.07）顯著高于正常組（P<0.01），治療組較哮喘組細胞總數（88.29±7.77、124.69±7.40）及NEU%（15.11±1.33、22.05±1.57）下降（P<0.01）。（5）各組豚鼠血白細胞分類計數：哮喘組豚鼠血NEU%顯著高于正常組（67.04±5

6、.56、30.74±6.02，P<0.01），治療組較哮喘組NEU%下降（46.90±5.25、67.04±5.56，P<0.01）。
　　2.各組豚鼠血中性粒細胞KLF2表達及定位、KLF2mRNA和蛋白表達情況
　　免疫熒光、Real-time PCR及Western blot檢測結果顯示，各組豚鼠血中性粒細胞中KLF2平均光密度、KLF2 mRNA及蛋白表達量：哮喘組<哮喘治療組<正常組（P均<0.01）。
　　

7、3.各組豚鼠血清及肺泡灌洗液中S1P表達情況
　　ELISA檢測結果表明，各組豚鼠血清及肺泡灌洗液中S1P表達：哮喘組>哮喘治療組>正常組（P均<0.01）。
　　4.各組豚鼠血中性粒細胞S1PR1 mRNA和蛋白表達變化
　　Real-time PCR及Western blot檢測結果顯示，各組豚鼠血中性粒細胞S1PR1 mRNA及蛋白表達量：哮喘組>哮喘治療組>正常組（P均<0.01）。
　　5.遷移實驗檢測

8、各組豚鼠中性粒細胞的遷移情況
　　根據預實驗結果選取0.1uM濃度時的S1P進行Transwell實驗，結果顯示，各組豚鼠血中性粒細胞遷移率：哮喘組>哮喘治療組>正常組（P均<0.01）。
　　6.KLF2與S1PR1mRNA及蛋白做Pearson相關分析，結果提示二者之間呈負相關。
　　7.KLF2、S1PR1蛋白與各組哮喘豚鼠模型中性粒細胞遷移率做
　　Pearson相關分析，結果提示KLF2與中性粒細胞遷移

9、率呈負相關，S1PR1與中性粒細胞遷移率呈正相關。
　　結論：
　　1.支氣管哮喘豚鼠中性粒細胞KLF2表達減少，S1PR1表達上調，經地塞米松治療后KLF2表達較哮喘組上升，S1PR1表達較哮喘組下降。
　　2.支氣管哮喘豚鼠中性粒細胞中KLF2與S1PR1呈負相關性。
　　3.支氣管哮喘豚鼠中性粒細胞中KLF2可能通過減弱中性粒細胞的遷移而發(fā)揮抗炎作用。
　　4.在支氣管哮喘豚鼠模型中，趨化因子S1P與