KLF2與L-selectin、CXCR1-2對哮喘患者中性粒細胞粘附遷移的影響.pdf

1、背景及目的：支氣管哮喘是由多種細胞和細胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾病，既往認為哮喘是以嗜酸粒細胞（EOS）炎癥為特征的變應(yīng)性疾病。但近年來，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)有一部分是以中性粒細胞為主，尤其是重癥哮喘、難治性哮喘患者，但對于支氣管哮喘患者氣道內(nèi)中性粒細胞增多的機制至今并未闡明。本實驗在前期細胞及動物研究的基礎(chǔ)上主要從臨床水平去闡述KLF2與L-selectin、CXCR1、CXCR2、CD11a、CD11b、CD18對支氣管哮喘患者中性

2、粒細胞粘附遷移的影響。
　　方法：隨機收集哮喘患者29例，并按照病情程度分為輕度哮喘組（L組）13例、中度哮喘組（M組）11例、重度哮喘組（S組）5例，并收集與哮喘患者性別及年齡相匹配的健康對照組（C組）12例，進行白細胞分類計數(shù),利用梯度離心法分離中性粒細胞并利用迪夫染色鑒定中性粒細胞，Real-time PCR檢測KLF2、L-selectin、CXCR1、CXCR2、CD11a、CD11b、CD18mRNA表達，Wester

3、n-blot檢測KLF2、L-selectin、CXCR1、CXCR2蛋白表達，流式細胞術(shù)檢測L-selectin、CD11a、CD11b、CD18平均熒光強度，ELISA檢測血清中IL-8濃度，Transwell小室檢測中性粒細胞的遷移能力，粘附實驗檢測中性粒細胞的粘附能力。
　　結(jié)果：
　　1.外周血白細胞分類計數(shù)
　　C組、L組、M組、S組中性粒細胞百分比（61.35(51.90～65.70)、62.54(54.

4、75～66.12)、70.20(65.34～75.50)、89.84(73.35～94.57））依次呈上升趨勢，且M組與C組、L組比較、S組與C組、L組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。輕度哮喘組嗜酸性粒細胞百分比較其他三組高，并且S組與C組、L組比較、M組與L組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　2.中性粒細胞的分離及鑒定
　　從外周血中分離出中性粒細胞，通過迪夫染色鑒定中性粒細胞，且分離出的中性粒細胞純度

5、在95％以上。
　　3.各組研究對象外周血中性粒細胞KLF2、L-selectin、CXCR1、CXCR2、CD11a、CD11b、CD18mRNA表達變化
　　Real-time PCR結(jié)果顯示：C組、L組、M組、S組KLF2mRNA相對表達量（1.03（0.88～1.95）、0.82（0.55～1.31）、0.70（0.37～0.98）、0.65（0.44～0.81））依次呈下降趨勢，而L-selectin mRNA的相

6、對表達量（1.01（0.92～1.14）、1.48（1.07～2.07）、2.93（2.62～3.51）、6.41（5.35～6.96））依次呈增加趨勢，CXCR1、CXCR2、CD11a、CD11b、CD18 mRNA的表達均呈逐漸增加趨勢，且以上因子M、S組與C組比較、L組與S組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。
　　4.各組研究對象外周血中性粒細胞KLF2、L-selectin、CXCR1、CXCR2蛋白表達變化

7、>　　Western blot結(jié)果顯示：C組、L組、M組、S組KLF2蛋白相對表達量（0.52（0.39～0.61）、0.45（0.39～0.55）、0.37（0.31～0.43）、0.26（0.25～0.30））依次呈下降趨勢，且M、S組與C組比較、L組與S組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。而L-selectin蛋白的表達量（0.26（0.22～0.28）、0.35（0.29～0.44）、0.38（0.31～0.46）、0.3

8、9（0.36～0.42））依次呈增加趨勢，且L、M、S組與C組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。CXCR1、CXCR2蛋白的表達量均呈逐漸增加趨勢，且M、S組與C組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。
　　5.各組研究對象外周血中性粒細胞L-selectin、CD11a、CD11b、CD18的平均熒光強度
　　流式細胞術(shù)結(jié)果顯示：L-selectin、CD11a、CD11b、CD18的平均熒光強度在C組、L組、M組

9、、S組中依次呈增加趨勢，且M、S組與C組比較、L組與S組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。
　　6.各組研究對象外周血血清中IL-8表達情況
　　ELISA結(jié)果顯示：C組、L組、M組、S組血清中IL-8的表達量依次呈增加趨勢，且M、S組與C組比較、S組與L組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。
　　7.各組研究對象外周血中性粒細胞的遷移情況
　　根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果選取濃度為100ng/ml的IL-8進行Tr

10、answell實驗，結(jié)果顯示：各組研究對象外周血中性粒細胞遷移率：S組＞M組＞L組＞C組，且L、M、S組與C組比較、L組與S組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　8.各組研究對象外周血中性粒細胞的粘附情況
　　各組研究對象外周血中性粒細胞粘附能力結(jié)果顯示：S組＞M組＞L組＞C組，且M、S組與C組比較、L組與S組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。
　　9.各組血中性粒細胞KLF2與L-selectin、C