抑制自噬對順鉑治療卵巢癌療效的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：本研究以耐藥細(xì)胞COC1/DDP為研究對象，通過分析自噬對卵巢癌順鉑敏感性的影響，探討自噬與卵巢癌順鉑耐藥性的關(guān)系，為卵巢癌治療奠定基礎(chǔ)。
　　方法：采用單丹（磺）酰戊二胺(MDC)染色技術(shù)，在熒光顯微鏡下對細(xì)胞的自噬情況進(jìn)行定性觀察;以MTT法檢測自噬特異性抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-MA)對順鉑(DDP)誘導(dǎo)的耐藥細(xì)胞COC1/DDP的細(xì)胞生長率的影響，流式細(xì)胞儀檢測凋亡，Real-time PCR檢測自噬相關(guān)因子Becl

2、in1、LC3-Ⅱ及凋亡相關(guān)因子caspase-8的表達(dá)，Western blot法檢測自噬相關(guān)因子Beclin1、LC3-Ⅱ及凋亡蛋白caspase-8的表達(dá)。
　　結(jié)果：1、MDC熒光染色顯微鏡下觀察COC1/DDP細(xì)胞株自噬囊泡的形成情況，發(fā)現(xiàn)陰性對照組僅可見少量熒光強(qiáng)度減弱的自噬囊泡，DDP處理COC1/DDP細(xì)胞48h后，可誘導(dǎo)其發(fā)生自噬，順鉑組卵巢癌細(xì)胞熒光強(qiáng)度增強(qiáng)的自噬囊泡明顯增多，而聯(lián)合應(yīng)用3-MA48h后熒光增強(qiáng)

3、的自噬囊泡較順鉑組明顯減少。
　　2、MTT結(jié)果顯示:DDP處理COC1/DDP細(xì)胞48h后，順鉑組與聯(lián)合應(yīng)用3-MA組的生長抑制率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(48.83％ vs75.12％，P＜0.05)。
　　3、流式細(xì)胞技術(shù)結(jié)果顯示:流式細(xì)胞儀測定COC1/DDP的陰性對照組凋亡率為7.2％，順鉑組作用后，COC1/DDP的凋亡率為14.3％，順鉑作用后COC1/DDP凋亡率均較陰性對照組增強(qiáng)，但不明顯，相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

4、＞0.05)。3-MA聯(lián)合順鉑組凋亡率較順鉑組增高，相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，且細(xì)胞凋亡以早期凋亡為主。
　　4、Real-time PCR結(jié)果顯示:DDP處理COC1/DDP細(xì)胞48 h后，順鉑組與聯(lián)合應(yīng)用3-MA比較，順鉑組COC1/DDP細(xì)胞中自噬相關(guān)因子Beclin1、LC3-Ⅱ蛋白的mRNA表達(dá)明顯增強(qiáng)，而凋亡因子Caspase-8 mRNA的表達(dá)順鉑與3-MA聯(lián)合應(yīng)用組較順鉑組細(xì)胞明顯升高，其灰度值比較差異

5、均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(P＜0.01)。
　　5、Western-Blot結(jié)果顯示:DDP處理COC1/DDP細(xì)胞48h后。順鉑組與聯(lián)合應(yīng)用3-MA比較，順鉑組COC1/DDP細(xì)胞中自噬相關(guān)因子Beclin1、LC3-Ⅱ蛋白明顯增多，而凋亡因子Caspase-83-MA+順鉑組較順鉑組細(xì)胞明顯升高，其灰度值比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　結(jié)論：1、自噬現(xiàn)象可能是卵巢癌順鉑耐藥的機(jī)制之一。
　　2、抑制自噬增加了