著床窗口期小鼠子宮組織中長鏈非編碼RNA的鑒定及其功能研究.pdf

1、胚胎的成功植入依賴于容受性子宮與活性囊胚之間復(fù)雜的分子對話，子宮容受性的建立是哺乳動物胚胎成功植入的關(guān)鍵步驟。子宮內(nèi)膜僅在一段十分短暫的時(shí)間內(nèi)具有接受活性囊胚的能力，這一時(shí)期叫做“著床窗口期”。盡管體外受精和胚胎移植技術(shù)在生產(chǎn)實(shí)踐中已被廣泛應(yīng)用，但是妊娠率依然不理想，子宮內(nèi)膜容受性破壞被認(rèn)為是輔助生殖技術(shù)失敗的主要原因之一。既往的研究充分顯示了蛋白編碼基因和miRNAs在子宮內(nèi)膜容受性建立、胚胎植入以及后繼蛻膜化過程中所發(fā)揮的重要作用。

2、長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)作為非編碼RNA家族中數(shù)量最多的一員，在卵母細(xì)胞成熟和早期胚胎發(fā)育過程中的功能已有深入研究，但在胚胎著床過程中的作用鮮有報(bào)道。本試驗(yàn)收集妊娠小鼠第4天、第5天著床位點(diǎn)和非著床位點(diǎn)子宮樣本進(jìn)行深度測序，以期獲得小鼠著床窗口期子宮中的lncRNAs圖譜，為今后深入研究lncRNAs在子宮內(nèi)膜容受性建立以及后繼蛻膜化過程中的作用及機(jī)制奠定基礎(chǔ)。本試驗(yàn)得到的主要結(jié)果如下:<

3、br>　　1通過Illumina HiSeqTM2500高通量測序平臺獲得了小鼠著床窗口期子宮組織中的lncRNAs圖譜，共得到lncRNA有7764個(gè)，其中已知lncRNA6179個(gè)，新預(yù)測lncRNA1585個(gè)。我們從中挑選了13個(gè)差異表達(dá)的lncRNAs并對其進(jìn)行了qRT-PCR驗(yàn)證，與測序結(jié)果相吻合。
　　2進(jìn)一步對所獲得的lncRNAs的表達(dá)水平、序列和位點(diǎn)保守性進(jìn)行分析，預(yù)測lncRNA的cis和trans作用靶基因;

4、將獲得的74個(gè)差異表達(dá)lncRNAs靶基因進(jìn)行了GO和KEGG富集分析，發(fā)現(xiàn)在植入窗口期差異表達(dá)的lncRNAs主要參與組織重塑、免疫反應(yīng)和代謝相關(guān)過程，對胚胎著床過程中的多種信號通路具有調(diào)控作用。
　　3在測序結(jié)果中，我們發(fā)現(xiàn)一個(gè)在小鼠妊娠第4天子宮中顯著上調(diào)，在第5天著床位點(diǎn)和非著床位點(diǎn)差異表達(dá)的已知lncRNA GAS5。進(jìn)一步通過構(gòu)建小鼠早期妊娠、延遲著床與激活、類固醇激素處理模型，揭示GAS5在著床窗口期子宮中呈現(xiàn)動態(tài)表

5、達(dá)模式，GAS5在妊娠子宮中的表達(dá)受活性胚胎和孕酮的調(diào)節(jié)，預(yù)示著GAS5可能在子宮內(nèi)膜容受性的建立以及胚胎植入過程中發(fā)揮作用。
　　4 FISH的結(jié)果表明，GAS5定位于小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞核。人工誘導(dǎo)蛻膜化子宮中GAS5的表達(dá)顯著上調(diào)，隨體外誘導(dǎo)蛻膜化時(shí)間的增加GAS5表達(dá)下降，預(yù)示著GAS5可能在蛻膜化過程發(fā)揮一定的功能。
　　綜上所述，本研究建立了小鼠著床窗口期lncRNAs圖譜，篩選出著床窗口期差異表達(dá)的lnc