TACE在著床窗口期小鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞中的表達(dá)及其抗體對胚泡粘附的影響.pdf

1、胚胎著床是決定人類和哺乳動物妊娠成功與否的關(guān)鍵,成功著床取決于接受態(tài)子宮內(nèi)膜與具侵入性胚泡間的同步協(xié)調(diào)作用。子宮內(nèi)膜僅在某一特定時期允許胚胎植入,此時子宮內(nèi)膜對胚泡具有容受性,這一短暫的時期稱為“著床窗”。胚胎著床包括胚泡脫透明帶、定位、粘附、侵入以及植入等幾個階段,這個過程涉及到很多生物因子的調(diào)控和參與。
　　 腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)換酶(TACE/ADAM17)因其能水解膜型腫瘤壞死因子(TNFα)而得名[1]。它具有ADAM家族

2、的共有序列:信號肽,前肽,金屬蛋白酶區(qū),解整合素區(qū),富半胱氨酸區(qū),跨膜區(qū)和胞漿區(qū)[2,3]?？伤舛喾N膜蛋白的跨膜區(qū)域釋放胞外區(qū),從而激活膜蛋白使其具有生物活性。已有研究表明,TACE在多種腫瘤如:乳腺腫瘤、腎細(xì)胞癌、肝細(xì)胞癌、前列腺癌、胰腺癌、結(jié)腸癌中有高表達(dá)[4,5],高表達(dá)的TACE在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要作用。目前認(rèn)為胚胎著床過程與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過程非常相似,很多在腫瘤中起作用的生物因子同樣也在胚胎著床過程中起作用。我們前期

3、的研究也表明:TACE在動情周期及早孕小鼠的子宮內(nèi)膜中存在規(guī)律性表達(dá),未孕期表達(dá)明顯低于孕期,在早孕期隨著妊娠天數(shù)的增加其表達(dá)呈現(xiàn)逐漸增強(qiáng)的趨勢,在妊娠第4天達(dá)到峰值[6],主要表達(dá)在子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞中。故推測TACE參與了胚胎的著床過程。
　　 目的:
　　 本實驗通過檢測腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)換酶(TACE)在小鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞中的表達(dá)及其在胚泡、上皮細(xì)胞共培養(yǎng)體系中對胚泡粘附的影響初步探討TACE在小鼠生殖中的作用以及

4、其與胚胎著床的關(guān)系。
　　 方法:
　　 1.體外培養(yǎng)孕4天(d4)小鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞和胚泡,構(gòu)建胚泡體外著床模型；
　　 2.通過細(xì)胞免疫化學(xué)染色方法鑒定體外培養(yǎng)體系中小鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞；
　　 3.運用RT-PCR以及細(xì)胞免疫化學(xué)方法分別檢測培養(yǎng)體系中TACE mRNA和蛋白的表達(dá)；
　　 4.向體外著床模型中添加不同濃度的TACE抗體,觀察對胚泡體外著床的影響,并用細(xì)胞免疫化學(xué)法檢測抗體

5、干預(yù)后各培養(yǎng)體系中TACE蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.原代培養(yǎng)小叔子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞生長旺盛。細(xì)胞鑒定結(jié)果顯示:上皮細(xì)胞對角蛋白抗體有棕黃色的陽性表達(dá),對波形蛋白抗體為陰性表達(dá)；
　　 2.PCR結(jié)果顯示TACE mRNA在培養(yǎng)體系中有高表達(dá),免疫化學(xué)的結(jié)果與RT-PCR結(jié)果相一致；
　　 3.小鼠胚泡體外共培養(yǎng)具有較高的粘附率,添加TACE抗體后胚泡帖附率均顯著低于對照組帖附率(P<0.05),