PPARγ在子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞中的表達(dá)及其功能的初步研究.pdf

1、目的:發(fā)育成熟的胚胎與處于接受態(tài)子宮內(nèi)膜之間的黏附是一個復(fù)雜的生理過程,也是決定著床成功與否的關(guān)鍵。這一過程受到黏附分子、生長因子、細(xì)胞因子及激素等多種因素的精確調(diào)控。
　　 過氧化物酶體增殖物激活受體γ(pcroxisomc proliferators activated receptorgamma,PPARγ)是近年來發(fā)現(xiàn)的一類核激素受體超家族成員。研究發(fā)現(xiàn),PPARγ被配體激活后,具有多種生物學(xué)功能,如在轉(zhuǎn)錄水平上抑制多種

2、細(xì)胞的增殖、促進(jìn)細(xì)胞的分化和凋亡及調(diào)控脂肪和糖類代謝等。在生殖系統(tǒng)中,PPARγ具有促進(jìn)排卵、胎盤發(fā)育等作用。子宮內(nèi)膜是具有周期性功能狀態(tài)改變的組織,子宮內(nèi)膜上皮從增生期到分泌期(分泌期早期、分泌期中期和分泌期晚期)不但有形態(tài)學(xué)上的改變,同時多種分子呈階段特異性表達(dá)。在胚胎著床期,子宮內(nèi)膜處于胚胎的接受態(tài),并與胚胎在子宮內(nèi)膜的識別、黏附和植入過程相互適應(yīng)和相互協(xié)調(diào)。但PPARγ在胚胎黏附中的作用尚未見報導(dǎo)。
　　 羅格列酮(Ro

3、siglitazone)作為近年來應(yīng)用較多的PPARγ的化學(xué)合成配體激動劑,應(yīng)用于實驗研究中。本實驗應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測人子宮內(nèi)膜組織中月經(jīng)周期不同時段PPARγ的表達(dá)情況,并分析不同接受態(tài)體外培養(yǎng)的人子宮內(nèi)膜細(xì)胞系RL95-2細(xì)胞及HEC1-A細(xì)胞中PPARγ的表達(dá)差異及羅格列酮處理后對胚胎黏附功能的影響,為探討胚胎著床的分子機制提供一定的理論基礎(chǔ)。
　　 方法:(1)應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測人子宮內(nèi)膜組織中月經(jīng)周期不同時

4、段PPARγ的表達(dá)水平。(2)培養(yǎng)高接受態(tài)人的子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞(RL95-2)和低接受態(tài)的人子宮內(nèi)膜細(xì)胞(HEC1-A),采用RT-PCR和Western blot方法檢測兩種細(xì)胞中PPARγ表達(dá)的差異,及羅格列酮和胚胎細(xì)胞刺激后RL95-2細(xì)胞中PPARγ的表達(dá)。(3)利用培養(yǎng)的RL95-2和HEC1-A制備細(xì)胞單層,并在不同劑量羅格列酮(10μM,20μM)處理的RL95-2細(xì)胞單層上,分別加入胚胎細(xì)胞(JAR),構(gòu)成體外胚胎黏附模

5、型。分析胚胎細(xì)胞與不同處理組子宮內(nèi)膜細(xì)胞的黏附率。
　　 結(jié)果:(1)免疫組織化學(xué)方法分析結(jié)果顯示PPARγ在人子宮內(nèi)膜組織增生期和分泌早期未見表達(dá),從分泌中期開始有表達(dá),于分泌晚期其表達(dá)明顯增加。(2)RT-PCR及Western blot分析結(jié)果表明高接受態(tài)人子宮內(nèi)膜細(xì)胞RL95-2及低接受態(tài)人子宮內(nèi)膜細(xì)胞HEC1-A中均有PPARγ表達(dá),但在RL95-2中PPARγ的表達(dá)低于在HEC1-A中的表達(dá)。人胚胎細(xì)胞JAR及羅格列

6、酮刺激RL95-2細(xì)胞后,PPARγ表達(dá)增加。(3)人胚胎細(xì)胞JAR與高接受態(tài)人子宮內(nèi)膜細(xì)胞RL95-2的黏附率高于其與低接受態(tài)人子宮內(nèi)膜細(xì)胞HEC1-A的黏附率。JAR細(xì)胞與經(jīng)過不同濃度羅格列酮(10μM,20μM)作用后的RL95-2細(xì)胞的黏附率低于其與正常RL95-2細(xì)胞的黏附率。
　　 結(jié)論:PPARγ在人子宮內(nèi)膜組織中有階段特異性表達(dá),于分泌晚期其表達(dá)最高。PPARγ在不同接受態(tài)培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜細(xì)胞中,高接受態(tài)人子宮內(nèi)膜