子宮內(nèi)膜癌細胞中孕激素膜受體表達的初步研究.pdf

1、目的：用異硫氰酸熒光素標記的牛血清白蛋白—孕酮復合物(P—BSA—FITC)染色，運用直接熒光標記及流式細胞技術(shù)檢測子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細胞膜孕激素受體表達情況，通過免疫印記雜交技術(shù)檢測子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細胞內(nèi)p—ERK表達的變化，以期證實子宮內(nèi)膜癌細胞中孕激素膜受體的存在，進一步完善孕激素的非基因作用機制。探討熒光標記孕酮在孕激素非基因作用機制研究中的應用價值。 方法：①用異硫氰酸熒光素標記的牛血清白蛋白—孕酮復

2、合物作用于子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細胞，熒光顯微鏡下觀察細胞中熒光標記部位。②流式細胞儀檢測不同濃度的異硫氰酸熒光素標記的牛血清白蛋白—孕酮復合物作用下，在不同時點時細胞熒光標記情況。③免疫印跡雜交技術(shù)檢測不同濃度異硫氰酸熒光素標記的牛血清白蛋白—孕酮復合物作用不同時間時，子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細胞中p—ERK表達的變化。 結(jié)果：⑴P—BSA—FITC作用于子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細胞后，在細胞膜上可見熒光染色，而核內(nèi)未

3、見熒光染色。用BSA—FITC代替p—BSA—FITC，未見熒光染色細胞。⑵流式細胞儀檢測結(jié)果顯示，不同濃度的P—BSA—FITC作用下，在各時點的熒光標記細胞數(shù)均高于空白對照組，其中以25ug/ml組熒光標記率最高。⑶P—BSA—FITC作用下，細胞內(nèi)p—ERK水平受到抑制，在作用5分鐘時抑制作用最強。 結(jié)論：①在子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細胞膜表面存在著孕激素膜受體，其與孕激素的結(jié)合能力大小與孕激素的濃度和作用時間有關(guān)。②孕