鈍刺血蜱共生菌和肩突硬蜱病原菌的研究.pdf

1、蜱是專性吸血的體外寄生節(jié)肢動物，其寄生宿主種類廣泛，易獲得多種病原菌，且廣泛傳播，引發(fā)疾病，對人類和野生動物的健康以及畜牧業(yè)發(fā)展造成嚴重危害。同時，蜱體內(nèi)也寄生多種共生菌，與宿主的生命活動密切相關。鈍刺血蜱Haemaphysalis doenitzi是體外寄生的三宿主蜱，主要分布在中國、日本、緬甸、老撾、印度、泰國、馬來西亞和澳大利亞等地，寄生在鳥類及小型哺乳動物體表，可攜帶多種病原菌。肩突硬蜱Ixodes scapularis，在全世

2、界廣泛分布，主要集中在美國東北部和中部，是伯氏疏螺旋體、嗜吞噬細胞無形體和微小巴貝蟲3種病原體的主要傳播媒介，被認為是美國公共衛(wèi)生領域最重要的蜱種之一。
　　本論文以鈍刺血蜱和肩突硬蜱為研究對象，運用分子生物學、分子系統(tǒng)學、形態(tài)學以及行為學等方法，對鈍刺血蜱體內(nèi)共生菌的種類、生物學特性和數(shù)量動態(tài)以及肩突硬蜱的探尋行為和其體內(nèi)伯氏疏螺旋體感染率進行分析。本研究不僅豐富了蜱類共生菌資源，加深了對共生菌特性和功能的了解，初步反映了病原菌

3、與宿主蜱行為的關系，而且也為進一步研究蜱類共生菌與宿主之間的共生機制和探索蜱類與病原體相互作用關系奠定基礎，并最終為開發(fā)新的防治技術提供理論依據(jù)。本論文主要研究結果如下:
　　1、通過細菌16S rRNA基因克隆文庫構建及PCR-RFLP分析，檢測到野外采集的鈍刺血蜱體中主要的微生物有鞘氨醇單胞菌Sphingomonas不動桿菌屬Acinetobacter和一種新的Francisella-like共生菌(FLEs-Hd)。通過系統(tǒng)

4、發(fā)育樹分析發(fā)現(xiàn)FLEs-Hd共生菌與邊緣璃眼蜱Hyalomma marginatum marginatum和血紅扇頭蜱Rhipicephalus sanguineus體內(nèi)的Francisella-like共生菌的親緣關系較近。
　　2、運用診斷PCR和透射電子顯微鏡(TEM)技術檢測并分析了共生菌的生物學特性，結果顯示，F(xiàn)LEs-Hd在野外采集的雌雄蜱中的感染率均為100％，在宿主中可進行穩(wěn)定的垂直傳遞，不能進行水平傳遞，在雌蜱的

5、卵巢、馬氏管、唾液腺和中腸組織中均有分布，不具有組織特異性，由此確定FLEs-Hd是鈍刺血蜱的主要共生菌。
　　3、運用熒光實時定量PCR(real time-qPCR)技術檢測并分析了FLEs-Hd共生菌在鈍刺血蜱整個發(fā)育階段中的密度動態(tài)。結果顯示，F(xiàn)LEs-Hd在卵中密度高于幼蜱和若蜱階段，而低于成蜱階段，說明FLEs-Hd在宿主中進行垂直傳遞時存在明顯的“瓶頸效應”。在幼蜱，若蜱和雄蜱從饑餓期到飽血期的過程中，飽血后共生菌的

6、密度均高于饑餓期，表明FLEs-Hd可能與宿主的飽血過程相關。在饑餓雌蜱中，F(xiàn)LEs-Hd的密度在吸血前一天達到最大值，說明FLEs-Hd可能與雌蜱吸血繁殖活動的進行密切相關。
　　4、運用熒光實時定量PCR技術檢測并分析了FLEs-Hd共生菌在宿主繁殖期不同組織中的密度動態(tài)，結果顯示，F(xiàn)LEs-Hd在卵巢和馬氏管中的密度遠高于中腸和唾液腺組織。在蜱吸血初期（吸血期第2天）和接近飽血前（吸血期第4天）的卵巢組織中，F(xiàn)LEs-Hd的

7、密度都處于較高水平，該共生菌密度的變化趨卵黃原蛋白合成初期迅速增長，因此推斷FLEs-Hd共生菌與卵巢初期發(fā)育和宿主繁殖過程密切相關，可能為宿主提供卵巢發(fā)育所需的營養(yǎng)物質(zhì)或調(diào)節(jié)因子。
　　5、運用行為學、分子生物學等方法，檢測美國北部和南部地區(qū)肩突硬蜱的探尋行為及其體內(nèi)伯氏疏螺旋體的感染率，美國北部地區(qū)的肩突硬蜱中的探尋行為較南部地區(qū)的活躍，且伯氏疏螺旋的感染率也高于南部地區(qū)，間接闡述了美國萊姆病由南向北逐漸遞增的原因。但伯氏疏螺