苛養(yǎng)菌及人畜共患病原菌

1、苛養(yǎng)菌及人畜共患病原菌,,適用教材《微生物學和微生物學檢驗》俞樹榮主編 人衛(wèi)97年10月版,第十九章 小細菌 P295,內容：嗜血桿菌屬、鮑特菌屬大綱要求：掌握嗜血桿菌屬、鮑特菌屬的生物學特性及鑒定 （布魯菌屬、巴斯德菌屬、弗朗西斯菌屬歸于人獸共患病原菌）,第一節(jié) 嗜血桿菌屬(Haemophilus),嗜血桿菌屬為一群無動力、無芽胞、菌體呈球桿狀的革蘭陰性小桿菌，生長營養(yǎng)需求高，培養(yǎng)時需人工加入新鮮血液(X因子和V因子)才能

2、生長，故稱嗜血桿菌。對人類有致病意義的種有:流感嗜血桿菌(H.influenzae)、副流感嗜血桿菌(H.parainfluenzae)、杜克雷嗜血桿菌(H.ducreyi)、嗜沫嗜血桿菌(H.aphrophilus),一、生物學性狀,形態(tài)與染色：菌體短小、兩端鈍圓、革蘭陰性小桿菌。從病灶中新分離的菌株多呈球桿狀或雙球狀，有時可,呈短鏈。在陳舊培養(yǎng)物中呈多形性，有長桿狀或絲狀體。粘液型菌株有莢膜，有莢膜菌株多伴較強的毒力。,痰標本涂片

3、革蘭染色（流感嗜血桿菌）,培養(yǎng)特性:,需氧或兼性厭氧，初次分離需5～10%CO2才能生長良好，營養(yǎng)要求苛刻，在加入新鮮血液（含X因子和V因子）的巧克力培養(yǎng)基上經(jīng)24h培養(yǎng)，見灰白色、圓形、光滑、半透明、直徑 0.5 ～ 1mm小菌落。 部分毒性菌株(b型Hi) 可見粘液型菌落。,X因子V因子,X因子是對熱穩(wěn)定的物質，存在于血紅蛋白中的一種血紅蛋白衍生物，是一種含鐵的卟啉。它是細菌合成過氧化物酶、過氧化氫酶、

4、細胞色素氧化酶的輔基，這些酶類提供細菌氧化還原時進行電子傳遞。V因子是對熱不穩(wěn)定的維生素B類物質，存在于血液和某些植物組織中。它是一種脫氫酶的輔酶，在細菌的呼吸中起遞氫作用?？梢愿鶕?jù)細菌對XV因子需要的不同進行嗜血桿菌屬細菌的鑒定(見P295表19-1),培養(yǎng)特性:,衛(wèi)星現(xiàn)象：金黃色葡萄球菌和流感嗜血桿菌共同培養(yǎng)，由于金黃色葡萄球菌能合成較多的V因子，可以促進流感嗜血桿菌的生長，故在平板上可見金黃色葡萄球菌菌落周圍生長的流感嗜血桿菌

5、菌落大，而相對較遠處的流感嗜血桿菌菌落較小，此現(xiàn)象稱為“衛(wèi)星現(xiàn)象”,衛(wèi)星現(xiàn)象,生化反應,對流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌的鑒別常使用吲哚、脲酶、鳥氨酸脫羧酶等試驗進行(見P296表19-2)，由于嗜血桿菌屬細菌生化反應的不穩(wěn)定性，現(xiàn)多采用半自動化鑒定。,生化反應,二、臨床意義,流感嗜血桿菌：以b型有莢膜株致病為主，以兒童為主，成人較少。在引起肺炎的革蘭陰性菌中本菌占第3位，僅次于銅綠假單胞菌和肺炎克雷伯菌。副流感嗜血桿菌：在某些地區(qū)致病

6、情況與流感相似，甚至超過前者。嗜沫、副嗜沫、溶血嗜血桿菌：上呼吸道常居菌，條件致病。杜克雷嗜血桿菌：軟性下疳的病原菌。,三、微生物學檢查,(一)標本采集 根據(jù)病變部位采集不同標本。肺部感染患者應盡量減少上呼吸道分泌物的污染。(二)檢驗程序:見P297流程圖,三、微生物學檢查,(三)檢驗方法1、直接鏡檢:多用于腦脊液和膿液標本的檢驗，對呼吸道標本一般不采用直接鏡檢方法，總體意義不大。2、分離培養(yǎng)：氣體環(huán)境、培養(yǎng)基、XV

7、因子需要、抑菌物質(每毫升巧克力瓊脂內加萬古霉素50ug，桿菌肽300ug，氯林可霉素1ug)、衛(wèi)星現(xiàn)象,檢驗方法,X因子V因子需要試驗,流感嗜血桿菌,副流感嗜血桿菌,四、預防措施,對Hib感染最有效的預防措施是肌肉注射Hib偶聯(lián)菌苗。芬蘭赫爾辛基于70年代后期在0～4歲兒童中Hib腦膜炎的發(fā)病率為43/10萬。注射上述菌苗后到1991年發(fā)病率降為0。Hib的PRP可與4種蛋白載體（變異性白喉桿菌蛋白－Oligosaccharide

8、–CRM197 protein, HbOC、白喉桿菌類毒素－Diphtheria toxoids, D、腦膜炎雙球菌外膜蛋白復合物－Outer membrane protein compound, OMPC和破傷風桿菌類毒素－Tetanus toxoid，T）偶聯(lián)，分別構成4種類型的偶聯(lián)菌苗：PRP-HbOC、PRP-D、PRP-OMPC和PRP-T。目前至少有25個國家將Hib偶聯(lián)菌苗列入兒童的免疫計劃。Hib偶聯(lián)菌苗價格較昂貴，限

9、制了它在發(fā)展國家內應用，因此有人報道了一種經(jīng)濟的接種方案，即是給嬰兒接種1/2或1/3 三針全劑量的Hib偶聯(lián)菌苗，借此替代常規(guī)3針全劑量免疫的接種方案。以替代方案接種后91％～100％的嬰兒仍可達到保護性抗體的濃度30.15mg/ml），與3針全劑量的接種方案所產生的結果相似。若采用替代的接種方案可減少菌苗接種的費用，以利于在發(fā)展國家中推廣應用Hib偶聯(lián)菌苗。,補充資料,軟下疳1:該圖為典型的鏈狀排列的杜克雷嗜血桿菌，用人血液培養(yǎng)后取

10、材涂片，革蘭氏染色陰性，鏈狀排列。,補充資料,軟下疳3:左側腹股溝部有一個潛行性較深潰瘍，邊緣不整齊，略呈蛇形，潰瘍基底有膿性滲出物，潰瘍周圍皮膚呈現(xiàn)紫紅色暈。另有三個豆大、一個指頭大衛(wèi)星狀潰瘍性病損。病損觸之疼痛。,橫痃,第三節(jié) 鮑特菌屬(Bordetella),百日咳鮑特菌(B.pertussis)俗稱百日咳桿菌副百日咳鮑特菌(B.parapertussis)支氣管敗血鮑特菌(B.branchiseptica)鳥鮑特菌(B.

11、avium),一、生物學性狀（百日咳鮑特菌）,形態(tài)染色：革蘭陰性小桿菌，無芽胞，有莢膜。在液體培養(yǎng)基中可呈短鏈狀存在。培養(yǎng)：專性需氧。營養(yǎng)要求高，在鮑-金培(bordet-gengou)養(yǎng)基上需3-5天才能長出可見菌落。生化反應：見P301表19-5對抗生素的敏感性:紅霉素首選,其次氨芐青霉素、阿莫西林、利福平、復方SMZ等。,二、臨床意義:百日咳鮑特菌是百日咳的病原菌,1、疾病分期:卡他期：癥狀無特異性，與病毒性感冒類似，1-

12、2周，此期傳染性最強，采集標本陽性率最高。痙攣期：以陣發(fā)性劇烈咳嗽為主，1-4周，日平均發(fā)生10-20次（類似雞鳴），但嬰幼兒的咳嗽癥狀可以不明顯，而以合并癥為主，如肺炎、出血、神經(jīng)系統(tǒng)癥狀等?；謴推冢宏嚳葴p輕，完全 恢復需數(shù)周到數(shù)月。,痙咳期:咳嗽由單聲咳變?yōu)殛嚳?，連續(xù)十余聲至數(shù)十聲短促的咳嗽，繼而一次深長的吸氣，因聲門仍處收縮狀態(tài)，故發(fā)出雞鳴樣吼聲，以后又是一連串陣咳，如此反復，直至咳出粘稠痰液或吐出胃內容物為止。每次陣

13、咳發(fā)作可持續(xù)數(shù)分鐘，每日可達十數(shù)次至數(shù)十次，日輕夜重。陣咳時患兒往往面紅耳赤，涕淚交流、面唇發(fā)紺，大小便失禁。少數(shù)病人痙咳頻繁可出現(xiàn)眼瞼浮腫、眼結膜及鼻粘膜出血，舌外伸被下門齒損傷舌系帶而形成潰瘍。成人及年長兒童可無典型痙咳。嬰兒由于聲門狹小，痙咳時可發(fā)生呼吸暫停，并可因腦缺氧而抽搐，甚至死亡。此期短則1～2周。長者可達2月。,二、臨床意義(補充),二、臨床意義:,2、毒素(共有3種)百日咳毒素(PT):該菌的主要毒力因子，與陣發(fā)性劇

14、咳等臨床表現(xiàn)有關。絲狀血細胞凝集素(FHA):促進病原體與纖毛上皮細胞粘附。腺嘌呤環(huán)酶毒素(ACT):使吞噬細胞內cAMP濃度升高從而抑制其氧化活性，使呼吸道粘膜的抵抗力下降。,三、微生物學檢查,(一)標本采集： 通常在發(fā)病早期(1周內)采集鼻、咽拭子，做床邊接種或立即送至實驗室，采時間越遲陽性率越低，對小兒也可用咳碟法。(二)檢驗程序：見P302流程圖,三、微生物學檢查,(三)直接檢查（無特異性）DFA直接熒光抗體檢查

15、：可見外周黃綠色螢光，中心暗色的球桿菌，5個典型形態(tài)者為陽性?？乖瓩z出：用單克隆抗體如ELISA法。PCR法檢測核酸：目前缺乏統(tǒng)一的質量控制標準。,(四)分離培養(yǎng),培養(yǎng)基：鮑-金培養(yǎng)基或活性炭-馬血瓊脂，培養(yǎng)3-5天可檢出菌落。,(五)鑒定依據(jù),革蘭陰性小桿菌，無動力DFA法陽性普通血平板或巧克力平板不生長鮑-金培養(yǎng)基生長緩慢觸酶陽性，氧化酶陽性,人獸共患病原菌,布魯菌屬(小細菌)鼠疫耶爾森菌(腸桿菌科)土拉熱弗朗西斯菌

16、(小細菌)鼻疽假單胞菌(假單胞菌)紅斑丹毒絲菌(需氧革蘭陽性桿菌)炭疽芽胞桿菌(需氧革蘭陽性桿菌),第二節(jié) 布魯菌屬Brceulla P298,經(jīng)DNA-DNA雜交證實只有一個種，其它均為生物變種。對人類有致病的生物變種有：牛布魯菌：流產布魯菌羊布魯菌：馬爾他布魯菌豬布魯菌犬布魯菌,一、生物學性狀,形態(tài)染色：革蘭陰性小球桿菌，革蘭染色復染效果不好需延時至3min。培養(yǎng)特性：需氧，初次需5%-10%CO2。營養(yǎng)要

17、求高。生化反應：觸酶、氧化酶陽性(對人類有致病者),二、臨床意義,該病原菌引起人類布魯菌病，可以通過皮膚、呼吸道、消化道進入人體感染。感染人群多與動物性食品、毛皮加工或食用未消毒的牛奶感染?；颊咧饕獮榫Y表現(xiàn)：發(fā)熱(波浪熱)和其它全身癥狀。,第五節(jié) 弗朗西斯菌屬Francisella P304,該屬只有一個種：土拉熱弗朗西斯菌，引起人類土拉熱。病原菌常由野兔攜帶，又稱野兔熱桿菌?？梢蛑苯咏佑|而感染，也可因動物咬傷、蚊蟲

18、叮咬、食入污染食物、吸入等途徑感染。感染后表現(xiàn)為發(fā)熱、劇烈頭痛、關節(jié)痛，甚至發(fā)生衰竭和休克，表現(xiàn)與傷寒類似。局部感染時可出現(xiàn)潰瘍，局部淋巴結腫大、壞死等。,第三節(jié) 紅斑丹毒絲菌Erysipelothrix rhusiopathiae P262,本菌為紅紅斑丹毒絲菌病的病原菌。急性傳染，多發(fā)于家畜，人也可因接觸而引起皮膚軟組織感染，稱類丹毒。生物學性狀：革蘭陽性桿菌，厭氧或微需氧，觸酶氧化酶均陰性。臨床意義：多發(fā)生于屠宰工人

19、和魚、肉加工人員或獸醫(yī)。類丹毒為一種傳染性皮炎，常始于傷口，局部形成病灶，皮膚紅腫有水皰，局部淋巴結腫大，可伴有關節(jié)炎或全身癥狀。因可以產生蔓延性水腫，民間俗稱“流火”。,丹毒,左側大腿內側鮮紅一片，境界清楚，稍高出皮表，壓之皮色變白，放手即紅。大腿根部起紫色水泡，水泡破潰，基底色赤，痛如火燎，伴惡寒發(fā)熱，腿根部有腫大臖核。,丹毒,耳郭局部潮紅，邊緣清晰，與正常皮膚界限分明，皮膚表面有光澤并稍隆起。,第二節(jié) 炭疽芽胞桿菌Baci

20、llus anthracis P256,炭疽芽胞桿菌簡稱炭疽桿菌，引起人或動物炭疽病。宿主廣泛，傳播方式多樣，芽胞抵抗力很強，病死率很高。9.11事件后曾在美國部分地區(qū)引起大恐慌。,(一)生物學性狀,本菌為致病性細菌中最大的革蘭陽性桿菌。菌體兩端平齊，培養(yǎng)后呈竹節(jié)狀排列。芽胞多在有氧條件下形成，產毒株有明顯的莢膜。需氧或兼性厭氧，普通培養(yǎng)基上形成灰、粗糙型菌落，邊緣不整、卷發(fā)狀。液體培養(yǎng)基中由于形成長鏈而呈絮狀生長，在明膠培

21、養(yǎng)基中可使表面液化呈漏斗狀，在深部由于沿穿刺線擴散生長成倒松樹狀。,炭疽芽胞桿菌,在普通瓊脂平板培養(yǎng)24小時,長成直徑2～4mm的粗糙菌落。菌落呈毛玻璃狀，邊緣不整齊，呈卷發(fā)狀，有一個或數(shù)個小尾突起，這是本菌向外伸延繁殖所致 。,炭疽芽胞桿菌,炭疽芽孢桿菌的芽胞：芽胞細胞質（SMp），芽胞類核（SN），芽胞細胞膜（SM），芽胞細胞壁（SW），芽胞皮層（SCt），外芽胞膜（OSM），和芽胞殼（SC） 超薄切片，±81 000,炭

22、疽芽胞桿菌,炭疽芽孢桿菌的芽孢：Ⅰ，發(fā)芽中的芽孢，芽胞殼（↑）已崩解；Ⅱ發(fā)芽的芽胞，芽胞殼和胞子囊（↑↑）均已崩解；Ⅲ，芽孢已釋放，僅存芽胞囊碎片（↑↑↑）超薄切片，×28 000,炭疽芽胞桿菌,炭疽是炭疽桿菌所致人和畜類都可發(fā)生的急性傳染病，可分皮膚炭疽，肺炭疽和腸炭疽三型。診斷要點：皮膚炭疽通常發(fā)生于面，頸，手和前臂等露出部位的皮膚，往往單發(fā)。組織顯著腫脹及浸潤，由于組織出血壞死，在病灶的中心區(qū)可形成明顯凹陷的黑色干痂。局

23、部淋巴結腫大且?；?。病人常有發(fā)熱，嘔吐，頭痛，關節(jié)痛及全身不適等癥狀。大部分病例經(jīng)1-2周后黑痂脫落而成潰瘍，愈合成疤。少數(shù)嚴重病例。局部呈大片水腫及壞死。伴有高熱和嚴重的全身中毒癥狀，可致死亡。,炭疽芽胞桿菌,炭疽芽胞桿菌菌落表面的細胞呈曲線排列（↑）金屬鍍膜，×1 500,5、抗原結構,①莢膜多肽抗原，能抑制調理作用，與細菌的侵襲力有關，也能抗吞噬; 由D～谷氨酸多肽組成，抗原性單一，若以高效價抗莢膜血清與具莢膜炭疽桿菌

24、作用，在其周邊外發(fā)生抗體的特異性沉淀反應，鏡下可見莢膜腫脹。②菌體多糖抗原， 由等分子量的乙酰基葡萄糖胺和D～半乳糖組成，能耐熱，與毒力無關。這種抗原沒有特異性，能與其他需氧芽胞桿菌，肺炎球菌14型及人類A血型物質發(fā)生交叉反應。③芽胞抗原，芽胞抗原有免疫原性及血清學診斷價值。④保護性抗原，為一種蛋白質，是炭疽毒素的組成部分，具有很強的免疫原性；,6、毒素,炭疽桿菌繁殖體能分泌炭疽毒素，此毒素由第Ⅰ因子（水腫因子，EF）、第Ⅱ因子（

25、保護性抗原，PA）及第Ⅲ因子（致死因子，LF）所組成的復合多聚體。3種成分混合注入動物體內就出現(xiàn)炭疽病典型中毒癥狀。具有抗吞噬作用與免疫原性。,7、抵抗力,繁殖體 56℃2小時、75℃1分鐘 可被殺滅。繁殖體 常用濃度的消毒劑也能迅速殺滅。芽 胞 抵抗力極強，在自然條件或在腌漬的肉中能長期生存。在土壤中可存活數(shù)十年，在皮毛制品中可生存90年。芽 胞 經(jīng)直接日光曝曬100小時、煮沸40分鐘、140℃熱3小時、110℃高

26、壓蒸氣60分鐘、以及浸泡于10%福爾馬林液15分鐘、新配石炭酸溶液（5%）和20%漂白粉溶液數(shù)日以上，才能將芽胞殺滅。炭疽芽胞對碘特別敏感，對青霉素、先鋒霉素、鏈霉素、卡那霉素等高度敏感。,微生物學檢查,標本采集：采集皮膚炭疽的膿液、滲出物，吸入性炭疽的咯痰，腸炭疽的糞便以及病人的的血液等送檢，獸尸禁止解剖，可割取耳朵或舌尖一片送檢；檢材明顯污染者可先加熱65℃30分鐘以消滅雜菌。,檢驗程序：見P258流程圖 (1)涂片檢查　取水皰

27、內容物、病灶滲出物、分泌物、痰液、嘔吐物、糞便、血液及腦脊液等作涂片，先加1∶1000升汞固定，以破壞芽胞，染色后可發(fā)現(xiàn)有莢膜的典型竹節(jié)狀大桿菌。熒光抗體莢膜染色找到鏈狀大桿菌周圍有發(fā)熒光的莢膜者為陽性。(2)分離培養(yǎng)　檢材應分別接種于血瓊脂平板、普通瓊脂平板、碳酸氫鈉平板。血標本應事先增菌培養(yǎng)。如液體量很少，可先于肉湯內增菌4小時后接種于平板。如見可疑菌落，則根據(jù)生物學特征及動物試驗進行鑒定。,微生物學檢查,微生物學檢查,(3)As

28、coli試驗：由于炭疽芽胞桿菌的菌體多糖抗原能耐熱、耐腐敗，在病獸腐敗臟器或毛皮中雖經(jīng)長時間煮沸仍可與相應免疫血清發(fā)生沉淀反應，稱為Ascoli熱沉淀反應。由于炭疽桿菌沉淀原由于耐高熱性，在尸體組織或皮毛中數(shù)年仍能檢出，該試驗可用作追溯性診斷。,1．噬菌體裂解試驗 將一接種環(huán)37℃4～6h待檢菌肉湯培養(yǎng)物，涂布于普通營養(yǎng)瓊脂平板，干后將AP631炭疽噬菌體滴于平板中央或劃一直線，干后置37℃18h，出現(xiàn)噬菌斑或噬菌帶者為陽性。2．串

29、珠試驗 將待檢菌接種于含0.05～0.5IU/ml青霉素的培養(yǎng)基經(jīng)37℃培養(yǎng)6h后，炭疽桿菌可發(fā)生形態(tài)變化，形成大而均勻成串的圓球狀菌體，類炭疽桿菌無此現(xiàn)象。3．青霉素G抑制試驗 將待檢菌接種于含5、10、100IU/ml青霉素的普通營養(yǎng)瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)24h，炭疽芽胞桿菌一般在5 IU/ml的青霉素平板上仍能生長，在含10、100 IU/ml青霉素的平板上生長受到抑制而不生長。,微生物學檢查,4．串珠和青霉素G抑制聯(lián)合試驗

30、 將待檢菌新鮮肉湯培養(yǎng)物0.1ml滴于預溫的兔血瓊脂平板上，用L型棒涂抹均勻，干后用含青霉素1IU/片紙片貼于平板，37℃培養(yǎng)1～2h，打開平皿在低倍鏡下觀察，可見紙片周圍有一無菌生長的抑菌環(huán)，其外周由于青霉素濃度低，菌體細胞壁受損而形成串珠。平板繼續(xù)37℃孵育8～12h，測量其抑菌環(huán)直徑。5．碳酸氫鈉毒力試驗 將待檢菌接種于含0.5%NaHCO3和10%馬血清的瓊脂平板上，置10%CO2環(huán)境培養(yǎng)24～48h，有毒株形成莢膜，菌落