常見(jiàn)病原菌分離方法

1、常用的幾種典型的病原菌分離方法常用的幾種典型的病原菌分離方法1斑點(diǎn)病原菌的分離從病斑部分切取每邊3～5mm的小塊組織，在70％酒精中浸數(shù)秒鐘后，移入0.1％的升汞水溶液中處理3～5min，以滅菌水沖洗3次，移置培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基中，然后培養(yǎng)。2維管束組織內(nèi)病原菌的分離從根莖維管束組織分離病菌，可先將寄主病部表面用70％酒精擦拭消毒，將表皮組織用滅菌的解剖刀削去，然后切取其中小塊變色的維管束組織，用升汞或漂白粉液消毒后。，用滅菌水沖洗幾次，移

2、置培養(yǎng)基面上。3根腐病病原菌的分離根腐或基腐病的分離，由材料的大小決定。材料小的可仿照斑點(diǎn)病的分離法，材料大的則可以用維管束組織內(nèi)病原的分離法。4肉質(zhì)組織中病原菌的分離多肉的根、莖及果實(shí)等，可以采用維管束組織內(nèi)病菌分離法除去表面組織，切取小塊病組織分離。如有雜菌感染可采用“直接接種”法，待出現(xiàn)癥狀后，用此法再行分離。5種子內(nèi)病原菌分離將整個(gè)種子或者種子的一部分進(jìn)行表面消毒(升汞或漂白粉)，用滅菌水洗滌后，移置培養(yǎng)基上。6孢子分離法能產(chǎn)生

3、大量孢子的病菌如青霉素、鏈格孢等，則可配制成孢子懸浮液以稀釋法或劃線法分離之。7、土壤帶菌分離法為了研究一些真菌在土壤中存活和分布的情形，從有病的土壤中分離它們是必要的。分離方法是將土壤取出少許，配制成懸浮液，然后用稀釋法或劃線法分離。附錄2真菌真菌單孢單孢子分離技子分離技術(shù)一、目的要求一、目的要求了解單孢分離技術(shù)的基本原理，掌握簡(jiǎn)便實(shí)用的單孢分離方法。二、基本原理二、基本原理單孢分離的方法很多，如振落法、稀釋法和直接挑取法。振落法和稀

4、釋法的共同點(diǎn)都是采用某種方法，使真菌孢子較稀疏地分散在水瓊脂平板上，然后在顯微鏡下檢查尋找在水瓊脂平板表面的單個(gè)孢子，一旦找到理想的單個(gè)孢子，就通過(guò)無(wú)菌操作將其(連同一部分培養(yǎng)基)移植到PDA斜面培養(yǎng)基上，置適溫下培養(yǎng)，形成的菌落即為單孢系菌株。直接挑取法是在實(shí)體解剖鏡下直接挑取單個(gè)孢子進(jìn)行分離純化的方法。三、材料、用具與三、材料、用具與儀器1材料(依本地資源情況進(jìn)行選擇，下列材料供參考)(1)稻瘟病葉、病節(jié)、病穗頸(Pyricolar

5、iayzae)。(2)玉米大斑病葉(Exserohilumturcicum)。(3)玉米小斑病葉(Bipolarismaydis)。(1)、挑孢針的制作。把直徑為3～4mm，長(zhǎng)約15cm的玻璃棒一端在酒精燈上燒熔，將一個(gè)4號(hào)昆蟲(chóng)針尾部插入，把針尖部2mm左右彎折90而成。提示：提示：用金屬材料制作的挑孢針滅菌容易，不易碰碎，可以長(zhǎng)期使用。(2)把玉米大斑病病葉置于解剖鏡下，尋找目標(biāo)孢子?？梢韵仍诘头糯蟊堵?110)下尋找，在高放大倍率(

6、410)下，觀察是否為單個(gè)孢子。(3)找到分生孢子后，將挑孢針在酒精燈上高溫滅菌，待稍冷卻，用挑孢針把孢子粘上，在酒精等火焰上方移入試管斜面培養(yǎng)基上。25培養(yǎng)3～5d后，觀察是否長(zhǎng)出純菌落。提示：提示：挑孢針在挑取孢子時(shí)如果不易黏取，可以先將挑孢針在培養(yǎng)基上輕輕劃一下，增加黏性；如果在病葉上目標(biāo)真菌孢子大量成堆，或周圍有其他雜菌的孢子不易分開(kāi)時(shí)，可以取一個(gè)干凈的載玻片，用挑孢針挑取一些孢子，在載玻片上輕輕碰擊，使孢子互相散開(kāi)，然后在解剖

7、鏡下尋找單個(gè)孢子，挑取分離。如果進(jìn)行專性寄生菌的單孢分離，用挑孢針把孢子放在其寄主植物上即可獲得單孢菌系。五、五、實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)作業(yè)上交分離得到的單孢系菌種。六、思考六、思考題1如采用在水瓊脂平板上用孢子懸液劃線后再尋找單孢的方法能否進(jìn)行；單孢分離2設(shè)想還可以采用什么樣的方法進(jìn)行真菌的單孢分離3.用組織法分離長(zhǎng)出菌落后，如果多個(gè)菌落混雜在一起如何進(jìn)行進(jìn)一步的分離純化4.想一想直接挑取法除了進(jìn)行單孢分離外還有其他什么用途5單孢子分離技術(shù)有哪些優(yōu)

8、點(diǎn)附錄3真菌和真菌和細(xì)菌的菌種保藏菌的菌種保藏病原生物純培養(yǎng)的保存和貯藏技術(shù)是比較復(fù)雜而十分重要的。在實(shí)際研究工作中，經(jīng)常需要將保存的菌種與一些已知的或已鑒定過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)菌種對(duì)比。而被研究的分離物，一旦鑒定結(jié)束，也應(yīng)妥善保存和貯藏，以便今后進(jìn)一步研究和對(duì)比之用。菌種純培養(yǎng)的保存和貯藏中最重要的是如何保存這眾多的分離物，使之不會(huì)因貯藏條件不妥而死亡，不因保存方法不當(dāng)而發(fā)生變異，不被其他生物污染，能長(zhǎng)期保存其生命力和原有性狀不變。為達(dá)此目標(biāo)，通