毒死蜱農(nóng)藥降解菌及其降解特性的研究.pdf

1、當(dāng)前，韭菜地下害蟲韭蛆的肆虐，迫使菜農(nóng)在韭菜生產(chǎn)中大量使用化學(xué)殺蟲劑。毒死蜱是常用的有機(jī)磷殺蟲劑之一，雖然具有高效、低毒、廣譜、低殘留和低抗藥性等優(yōu)點(diǎn)，但大量使用造成了韭菜農(nóng)藥殘留超標(biāo)，嚴(yán)重危害了人類健康并造成了土壤生態(tài)環(huán)境的日益惡化。眾所周知，微生物在降低作物及土壤農(nóng)藥殘留中發(fā)揮了重要作用，許多農(nóng)藥降解微生物已得到開發(fā)應(yīng)用。針對(duì)上述現(xiàn)狀，本文從韭菜植株和韭菜根際土壤中分離并篩選具有毒死蜱降解能力的生防菌株，對(duì)于韭菜的無公害生產(chǎn)具有重要

2、的現(xiàn)實(shí)意義和實(shí)踐意義。具體結(jié)果如下:
　　1.從新鮮韭菜的根中分離到一株對(duì)多種蔬菜病原真菌有抑制作用的優(yōu)勢(shì)內(nèi)生細(xì)菌W7，其拮抗機(jī)制與已報(bào)道的其它生防細(xì)菌不同，其胞外代謝物對(duì)病原真菌無抑制作用，而菌體經(jīng)超聲波破碎及有機(jī)溶劑沉淀得到的菌體多糖粗提液可明顯抑制病原菌菌絲生長。而且，該菌能以100mg/L高效氯氰菊酯為唯一碳源生長，7d的降解率為51.3％，但不能降解毒死蜱。通過對(duì)其形態(tài)特征、生理生化及16S rDNA同源性序列分析，將其

3、鑒定為類芽孢桿菌(Paenibacillus spp。)。
　　2.從受農(nóng)藥污染的韭菜根際土壤中獲得了一株高效毒死蜱降解細(xì)菌D10，該菌能以毒死蜱為唯一碳源生長，6d內(nèi)對(duì)100mg/L的毒死蜱降解率達(dá)59.7％。通過形態(tài)特征、生理生化及16S rDNA同源性序列分析，鑒定該菌為不動(dòng)桿菌(Acinetobacter。spp)。
　　3.為進(jìn)一步研究毒死蜱降解菌D10的降解特性，測(cè)定了外加碳源濃度、pH、溫度、接種量及毒死蜱濃度

4、對(duì)菌株降解率和生長量的影響。結(jié)果表明，當(dāng)pH為8.0，溫度為30～35℃，接種量在5％，毒死蜱濃度為200mg/L以下時(shí)，菌株D10的降解效果較好；在pH為8.0以上，外加碳源1％以上，溫度為35℃，接種量10％，毒死蜱濃度為200mg/L以下時(shí)，菌株D10的生長量最大。
　　4.采用超聲波破碎、有機(jī)溶劑沉淀等方法從菌株D10中提取粗酶液，用于研究毒死蜱降解酶在細(xì)胞中的定位和性質(zhì)。結(jié)果表明:毒死蜱降解酶主要位于胞內(nèi)。該酶對(duì)毒死蜱的

5、酶促降解最適pH為8.0，在堿性條件下相對(duì)穩(wěn)定；最適溫度為30℃，且具有較好的熱穩(wěn)定性。
　　5.實(shí)驗(yàn)室模擬受污染土壤，研究菌株D10在土壤中的實(shí)際降解效果。結(jié)果表明，在添加了菌株D10的未滅菌土壤中，20d降解率達(dá)82.5％，而未滅菌土壤的自然降解率僅有26.7％，表明在土壤中添加菌株D10可明顯降低土壤中的毒死蜱殘留。
　　6.由于韭菜優(yōu)勢(shì)內(nèi)生細(xì)菌W7不能降解毒死蜱，為使其今后能通過轉(zhuǎn)基因的方式獲得毒死蜱降解能力，對(duì)菌株