煙酸對氧誘導新生小鼠視網(wǎng)膜病變的保護作用及機制的研究.pdf

1、分類號：分類號：密級：密級：UDC：學號：學號：406521413488南昌大學碩士研究生學位論文煙酸對氧誘導新生小鼠視網(wǎng)膜病變的保護作用及煙酸對氧誘導新生小鼠視網(wǎng)膜病變的保護作用及機制的研究機制的研究TheProtectiveRoleofNiacininOxygeninducedRetinopathyitsMechanism張鳳俊張鳳俊培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學附屬眼科醫(yī)院指導教師姓名、職稱：易敬林教授申請學位的學科門類：醫(yī)學碩士學

2、科專業(yè)名稱：眼科學論文答辯日期：2016年5月答辯委員會主席：周瓊評閱人：盲審2016年5月摘要摘要目的目的：觀察煙酸對氧誘導新生小鼠視網(wǎng)膜病變是否具有保護作用，并探索其相關(guān)的機制。方法方法：建立氧誘導新生小鼠視網(wǎng)膜病變模型：出生第7天（P7）C57BL6J新生小鼠80只隨機均分為常氧對照組（RA）、常氧煙酸干預組（RANiacin）、單純氧誘導視網(wǎng)膜病變組（OIR）和OIR煙酸干預組（OIRNiacin），每組20只。兩組OIR新生小

3、鼠P7連同母鼠放入75%1%氧濃度的氧艙中，P12取出放回正常空氣中再飼養(yǎng)5天，煙酸干預組母鼠飼以含質(zhì)量比0.5%煙酸的飼料，從幼鼠P7時開始喂食母鼠至P17。煙酸為水溶性維生素，可通過乳汁分泌，幼鼠按需吸允含有煙酸的乳汁。各組新生小鼠均于P17深度麻醉后經(jīng)含肝素PBS心臟灌注去除視網(wǎng)膜血管中血液后取右眼提取完整視網(wǎng)膜凍于80℃冰箱保存，取左眼固定后行石蠟包埋、OCT包埋、視網(wǎng)膜鋪片IsolectinIB4染色。免疫熒光檢測各組新生小鼠

4、視網(wǎng)膜中3硝基酪氨酸（3NT）、對氧磷酶2（PON2）和膠質(zhì)細胞纖維酸性蛋白（GFAP）表達；熒光探針CellROXGreen氧化應激試劑檢測各組活性氧自由基(ROS)水平；石蠟切片HE染色定量突破內(nèi)界膜新生血管內(nèi)皮細胞核數(shù)目；熒光標記的IsolectinIB4視網(wǎng)膜鋪片染色觀察各組小鼠全視網(wǎng)膜中央缺血無灌注區(qū)（VO）和病理性新生血管區(qū)（NV）變化；TUNEL染色檢測視網(wǎng)膜組織細胞凋亡情況；Westernblot測定各組視網(wǎng)膜組織中血管

5、內(nèi)皮生長因子（VEGF）、低氧誘導因子（HIF1a）、PON2和GFAP的表達，并通過檢測白蛋白Albumin的表達評判各組視網(wǎng)膜血管滲漏情況。結(jié)果結(jié)果：免疫熒光染色顯示OIR組視網(wǎng)膜GFAP標記的mller細胞活化，煙酸可逆轉(zhuǎn)GFAP表達的增加；同樣熒光顯示，PON2在視網(wǎng)膜mller細胞上有表達，煙酸可進一步上調(diào)PON2的表達起到抗氧化作用；HE染色和IB4血管染色結(jié)果表明，煙酸可抑制OIR小鼠視網(wǎng)膜血管異常；從蛋白水平上看，煙酸同