microRNA-146a介導(dǎo)宿主防御布氏菌侵染的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討microRNA-146a（miR-146a）表達(dá)與宿主防御布氏菌感染之間的關(guān)系并分析其作用機(jī)制。
　　方法：以人工合成的miR-146a模擬物為模板建立擴(kuò)增miR-146a的標(biāo)準(zhǔn)曲線。提取布病患者與健康志愿者血清的總RNA，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR（qRT-PCR）擴(kuò)增miR-146a。比較分析患者與健康志愿者之間miR-146a的表達(dá)差異；分別比較患者血清抗體滴度、發(fā)病天數(shù)及臨床癥狀與miR-146a表達(dá)水平的相

2、關(guān)性。用羊種布氏菌16M株感染小鼠巨噬細(xì)胞，從細(xì)胞裂解液中提取總RNA，運(yùn)用qRT-PCR對(duì)miR-146a的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。構(gòu)建小鼠布氏菌16M感染模型，提取脾臟總RNA進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增，觀察小鼠脾臟中miR-146a表達(dá)情況。分別將miR-146a模擬物（mimics）、抑制物（inhibitor）轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞，比較轉(zhuǎn)染后布氏菌生長(zhǎng)情況。
　　結(jié)果：患者血清中miR-146a表達(dá)明顯受到抑制，與健康志愿者相比差異具

3、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）；血清抗體滴度與miR-146a表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性，不同滴度組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；miR-146a表達(dá)與患者發(fā)病時(shí)間無(wú)關(guān)（P>0.05）；發(fā)熱和出汗癥狀與miR-146a濃度相關(guān)（P<0.05），而乏力、關(guān)節(jié)痛和腰背痛癥狀與miR-146a表達(dá)水平無(wú)相關(guān)性（P>0.05）；小鼠巨噬細(xì)胞感染布氏菌組miR-146a的表達(dá)在0h和24h受到顯著抑制，與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；

4、小鼠感染模型組miR-146a的表達(dá)與對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)相比明顯降低，兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；Hela細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-146a模擬物mimics與抑制物inhibitor后，感染16M組在4h與8h細(xì)菌生長(zhǎng)與空白組相比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；感染16M△virB組在4h時(shí)mimics組細(xì)菌生長(zhǎng)對(duì)比空白組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），在8h時(shí)inhibitor組細(xì)菌生長(zhǎng)對(duì)比空白組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0