鼠傷寒沙門氏菌spvB基因?qū)λ拗骷?xì)胞自噬的影響及其分子機(jī)制的研究.pdf

1、分類號(hào)： 密級(jí)：U D C ： 學(xué)號(hào)：406520615055南 昌 大 學(xué) 碩 士 研 究 生學(xué) 位 論 文鼠傷寒沙門氏菌 鼠傷寒沙門氏菌 spvB 基因?qū)λ拗骷?xì)胞自噬的影響 基因?qū)λ拗骷?xì)胞自噬的影響及其分子機(jī)制的研究 及其分子機(jī)制的研究Effects of spvB gene in Salmonella typhimurium on autophagy of hostcells and its molecular mechanism

2、賴華毅 賴華毅培養(yǎng)單位（院、系）：江西省兒童醫(yī)院指導(dǎo)教師姓名、職稱：陳強(qiáng) 教授 主任醫(yī)師申請(qǐng)學(xué)位的學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)學(xué)科專業(yè)名稱：兒科學(xué)論文答辯日期： 2018 年 6 月答辯委員會(huì)主席： 吳星恒評(píng)閱人： 陳曉劉燕玲2018 年 6 月摘要II摘 要目的： 目的：鼠傷寒沙門菌 spv 基因是沙門菌感染中重要的致病因子。spv 含有三個(gè)必需基因：正性轉(zhuǎn)錄調(diào)控基因 spvR 和兩個(gè)結(jié)構(gòu)基因 spvB 和 spvC。本研究通過建立鼠傷寒沙門氏菌感

3、染人腸黏膜上皮細(xì)胞的模型，觀察下調(diào) spvB 基因表達(dá)后，對(duì)于細(xì)胞自噬、自噬相關(guān)蛋白的影響，并探討 p38MAPK 信號(hào)通路在鼠傷寒沙門菌 spvB 基因影響腸上皮細(xì)胞自噬中的作用，為沙門菌感染的臨床治療提供新的研究思路和靶點(diǎn)，為進(jìn)一步研究耐藥及非耐藥沙門菌株中 spvB 對(duì)自噬影響的差異及其分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法： 方法：一、鼠傷寒沙門菌 spvB 基因?qū)τ谀c黏膜上皮細(xì)胞自噬的影響。分別使用攜帶 spvB 基因的鼠傷寒沙門氏菌野生株

4、STM-211、敲除 spvB 基因的鼠傷寒沙門氏菌突變株 STM-ΔspvB 和回補(bǔ)株 STM-c-spvB 與處于生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期的腸黏膜上皮細(xì)胞 Henle-407 細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)，再使用透射電子顯微鏡(transmission electron microscope，TEM)觀察細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)；單丹磺酰尸胺(monodansylcadaverin, MDC)染色后鏡下觀察；稀釋涂板作胞內(nèi)細(xì)菌計(jì)數(shù)；免疫印跡法(Western Blot，

5、WB)檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白 LC3 和 p62 的表達(dá)，并比較各感染組和對(duì)照組之間的自噬強(qiáng)度是否相同。二、鼠傷寒沙門菌 spvB 基因在影響 Henle-407 細(xì)胞自噬中 p38MAPK 信號(hào)通路的作用。在原有的感染模型基礎(chǔ)上增加 p38MAPK 通路抑制劑 SB203580 進(jìn)行干預(yù)對(duì)照。于共培養(yǎng)后的 1h 和 3h 收集細(xì)胞，通過免疫印跡法檢測(cè) p38 的磷酸化水平和自噬標(biāo)志蛋白 LC3、p62 的表達(dá)水平；免疫熒光染色觀察自噬蛋白