miRNA調(diào)節(jié)PD-1+耗竭性T細(xì)胞的作用機制研究.pdf

1、分類號：密級：UDC：學(xué)號：356529213007南昌大學(xué)博士研究生學(xué)位論文miRNA調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)PD1耗竭性耗竭性T細(xì)胞的作用機制研究細(xì)胞的作用機制研究miRNAregulateofprogrammedcelldeath1exhaustedTcells培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院指導(dǎo)教師姓名、職稱：閔衛(wèi)平教授申請學(xué)位的學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)博士學(xué)科專業(yè)名稱：臨床醫(yī)學(xué)論文答辯日期：2016年6月答辯委員會主席：程曉曙評閱人：2016年5月摘

2、要摘要第1章引言引言腫瘤微環(huán)境中存在多種因素可導(dǎo)致免疫不應(yīng)答或免疫低下，造成腫瘤免疫耐受。造成腫瘤免疫耐受原因有免疫負(fù)調(diào)控分子的改變，以調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（RegulatyTcells，Tregs）為代表的免疫抑制細(xì)胞的變化，可溶性細(xì)胞因子分泌改變，代謝功能異常等。耗竭性T細(xì)胞是一種T細(xì)胞功能缺陷的狀態(tài)，是一群效應(yīng)功能減弱，持續(xù)表達(dá)抑制性受體的T細(xì)胞，這些細(xì)胞在免疫耐受中起著重要作用。其表達(dá)的程序性細(xì)胞死亡因子1（programmedcell

3、death1，PD1）、T細(xì)胞免疫球蛋白域和粘蛋白域蛋白3（Tcellimmunoglobulindomainmucindomainprotein3TIM3）、B和T淋巴細(xì)胞衰減子（BTlymphocteattenuat，BTLA）是最重要的免疫負(fù)調(diào)控分子。PD1程序性死亡因子配體1（programmedcelldeathlig1，PDL1）信號通路可以負(fù)性調(diào)節(jié)效應(yīng)T細(xì)胞活性，與腫瘤免疫耐受及腫瘤進展有關(guān)。micrNA（miRNA）參與

4、腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程，在染色體異常、基因突變、基因多態(tài)性和表觀遺傳學(xué)改變等過程中發(fā)揮重要作用。本課題系統(tǒng)探討miRNA和腫瘤微環(huán)境中耗竭性T細(xì)胞的關(guān)系，為腫瘤診斷及腫瘤免疫治療尋找新的靶點和方向。第2章CD4T細(xì)胞中細(xì)胞中PD1和PD1細(xì)胞細(xì)胞miRNAs表達(dá)譜差異表達(dá)譜差異目的：目的：比較CD4T細(xì)胞中PD1和PD1細(xì)胞miRNAs表達(dá)譜差異，篩選PD1相關(guān)miRNA。方法：方法：建立小鼠黑色素瘤模型，分離荷瘤小鼠淋巴細(xì)胞，流式細(xì)胞儀分

5、選CD4PD1和CD4PD1T淋巴細(xì)胞，AffymetrixmiRNA3.0表達(dá)譜芯片檢測各組細(xì)胞miRNA表達(dá)，并用RTqPCR驗證。miRa軟件預(yù)測靶基因結(jié)合位點。雙熒光素酶報告基因測試系統(tǒng)檢測miRNA能否結(jié)合PD13’UTR。結(jié)果：結(jié)果：CD4PD1和CD4PD1T淋巴細(xì)胞中，共19個miRNA差異表達(dá)，其中8個miRNA在CD4PD1細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)，11個miRNA在CD4PD1細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)。RTqPCR檢測11個miRNA