炎性因子通過抑制胃上皮細(xì)胞中Hippo-YAP信號(hào)通路促進(jìn)胃黏膜發(fā)生EMT改變.pdf

1、目的：探討慢性炎癥性刺激對(duì)胃上皮細(xì)胞中Hippo-YAP信號(hào)通路的影響進(jìn)而促進(jìn)胃黏膜發(fā)生EMT改變。
　　方法：體外培養(yǎng)人胃粘膜上皮細(xì)胞（GES-1），觀察不同時(shí)間不同濃度的腫瘤壞死因子（TNF-α）或者N-甲基-N'-硝基-N-亞硝基胍（MNNG）體外刺激GES-1細(xì)胞后通過Western blotting測(cè)定刺激前后GES-1細(xì)胞中Hippo信號(hào)分子、EMT相關(guān)分子、CDX2等因子的變化情況。同時(shí)，選取最佳刺激條件下，使用細(xì)胞

2、免疫熒光技術(shù)觀察YAP分子在GES-1細(xì)胞中刺激前后入核的情況。在相同刺激條件下刺激瞬時(shí)轉(zhuǎn)染YAP siRNA的GES-1細(xì)胞，通過Western blotting觀察干擾前后GES-1細(xì)胞中Hippo信號(hào)分子、EMT相關(guān)分子、CDX2等因子的變化情況。同時(shí)通過ELISA測(cè)定MNNG體外刺激GES-1細(xì)胞前后細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-α的含量。
　　結(jié)果：GES-1細(xì)胞中Hippo信號(hào)分子、EMT相關(guān)分子、CDX2等因子的變化存在TNF

3、-α刺激的時(shí)間及濃度的依懶性，隨著TNF-α刺激的時(shí)間及濃度的延長(zhǎng)，Hippo-YAP信號(hào)通路逐漸被抑制，CDX2分子表達(dá)逐漸增加，E-cadherin分子表達(dá)逐漸被抑制，N-cadherin分子表達(dá)逐漸增加。在相同刺激條件下刺激瞬時(shí)轉(zhuǎn)染YAP siRNA的GES-1細(xì)胞，上訴因子的變化消失。MNNG刺激GES-1細(xì)胞后變化與TNF-α刺激相似，且MNNG刺激GES-1細(xì)胞后培養(yǎng)基內(nèi)TNF-α含量明顯增加，考慮MNNG刺激GES-1細(xì)胞