胃食管反流病食管黏膜上皮細(xì)胞間隙變化的研究.pdf

1、第一部分埃索美拉唑治療前后胃食管反流病食管黏膜上皮細(xì)胞間隙的變化。 1.研究目的：為澄清食管黏膜上皮細(xì)胞間隙的變化是否可以作為不同類型NERD的診斷和療效評估的客觀指標(biāo)，本研究觀察糜爛性食管炎(EE)、伴有或不伴有病理性酸反流的NERD患者在PPI治療前后DIS的變化。 2.對象與方法 (1)研究對象：本研究為前瞻性自身配對設(shè)計，病例選自在我院消化專科門診就診者，入選病例為以燒心為主訴，伴或不伴有反流，癥狀持續(xù)或

2、反復(fù)發(fā)作超過3個月，在就診前2周其發(fā)作頻率≥3天/周。15名無反流癥狀、經(jīng)胃鏡檢查無糜爛性食管炎、24h食管pH監(jiān)測結(jié)果在正常范圍的健康志愿者作為食管黏膜上皮細(xì)胞間隙的正常值參考。 (2)排除標(biāo)準(zhǔn)：內(nèi)鏡下胃、十二指腸潰瘍(無論活動期或靜止期)，糜爛性十二指腸炎，上消化道腫瘤，上消化道手術(shù)史，懷疑或證實有惡性腫瘤及其他嚴(yán)重器質(zhì)性疾病，腸易激綜合征，正在服用或估計試驗期間需要服用非甾體類消炎藥，試驗前14天內(nèi)服用過質(zhì)子泵抑制劑或7天

3、內(nèi)服用過H<,2>受體拮抗劑，妊娠或哺乳期婦女。 (3)研究方法： ①內(nèi)鏡檢查：所用胃鏡選定為奧林巴斯GIF-XQ240型胃鏡，由2名固定的醫(yī)師操作。 ②24 h食管pH監(jiān)測：有關(guān)操作及數(shù)據(jù)分析按本實驗室先前的報道進行，將24小時食道pH<4的時間百分比≥4.0﹪或Demeester評分≥14分定義為病理性酸反流。 ③PPI試驗：埃索美拉唑(耐信)40mg/d、每天1次、早餐前30min服用，療程14天

4、。患者逐日在日志卡上記錄每日癥狀的程度和頻率。PPI試驗陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：療程第8～14天內(nèi)燒心癥狀完全消失。 ④食管黏膜組織學(xué)及超微結(jié)構(gòu)檢查：a.內(nèi)鏡下活檢：標(biāo)本取自食道齒狀線上3～5cm處外觀正常的黏膜，每例取5塊，2塊送組織學(xué)檢查，3塊送電鏡檢查。b.組織學(xué)檢查：標(biāo)本在4﹪甲醛緩沖液固定，常規(guī)石蠟包埋、切片、蘇木素一伊紅染色。食管炎診斷及分級按Ismail-Beigi分類法。c.電鏡檢查：活檢組織保存于固定液戊二醛中，并以低溫

5、4℃保存后送中山大學(xué)電鏡室。標(biāo)本經(jīng)固定、脫水和包埋處理后制成超薄切片。用透射電子顯微鏡(日立H 600型)觀察，每例均選取基底膜之上第三層的棘細(xì)胞層細(xì)胞，照取10張照片。電鏡放大倍數(shù)為5000×。照片經(jīng)圖像分析儀(德國LEICA)數(shù)字化測量細(xì)胞間隙。選取每張照片上一個完整的細(xì)胞，隨機從10個不同位置(均垂直于細(xì)胞間隙)測量細(xì)胞間隙的寬度，間隔不少于1μm。共測量10張照片共100個細(xì)胞間隙寬度，取平均值作為細(xì)胞間隙的均值。電鏡檢查由1名

6、固定的操作者單盲法進行。 ⑤統(tǒng)計方法：應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件計算各項觀察指標(biāo)的均數(shù)和標(biāo)淮差，各組間DIS數(shù)值的比較時，先將觀察值進行編秩，經(jīng)方差齊性分析后，采用Student-Newman-Keuls法檢驗；治療前后DIS數(shù)值的比較采用配對樣本t檢驗。 3.結(jié)果 (1)一般資料完成整個研究流程的GERD患者共20例，其中糜爛性食道炎(EE組)6例(51±13歲，男：女為5∶1)、伴有病理性酸反流的NE

7、RD患者(NERD pH+組)9例(43±12歲，男：女為6∶3)、不伴有病理性酸反流但PPI試驗陽性的患者(NERD pH-組)5例(38±12歲，男：女為4∶1)。正常對照組15例(42±12歲，男：女為7∶8)。 (2) 食管黏膜的組織學(xué)改變按Ismail-Beigi分類，除EE組6例中2例，NERD pH+組和NERD pH-組各1例有輕度炎癥外，其余所有病例及正常對照者食管黏膜組織學(xué)改變均在正常范圍。 (3

8、) 各組間DIS的比較正常對照組、EE組、NERD pH+組及NERD pH一組的DIS(x±SD)分別為(0.67±0.04)μm、(1.33±0.13)μm、(1.45±0.16)μm和(1.37±0.11)μm，EE組、NERD pH+組及NERD pH-組的DIS均顯著高于正常對照組(p=0.000)。而EE組、NERD pH+組與NERD pH-組各組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.146，α=0.05)。 (4)食管

9、黏膜細(xì)胞間隙的正常值及治療前后各組DIS的變化以本研究15名正常對照者細(xì)胞間隙寬度作為正常值≤0.75μm(x±2SD)，經(jīng)2個月的埃索美拉唑40 mg/d治療后，17/20(85﹪)的患者食管上皮細(xì)胞間隙恢復(fù)正常，同時燒心癥狀消失。其中，8/9(88.89﹪)的NERD pH+患者，4/5(80﹪)的NERD pH-患者和5/6(83.33﹪)的EE患者達(dá)到該療效。 (5) 治療后DIS未恢復(fù)正常的病例情況本研究20例GER

10、D患者中有3例經(jīng)PPI治療2個月后DIS未恢復(fù)正常，EE、NERD pH+及NERD pH-組各有1例。NERD組的2例燒心癥狀未消失，而EE組的1例燒心癥狀消失。 第二部分不同疾病患者食管黏膜上皮細(xì)胞間隙的研究。 1.研究目的：為了解食管黏膜上皮細(xì)胞間隙增寬(DIS)作為診斷NERlD診斷客觀指標(biāo)的特異性，本研究比較不同類型的GERD(EE、伴有病理性酸反流的NERD和不伴有病理性酸反流的NERD)、與NERD鑒別診

11、斷存在困難的功能性燒心(FH)及與NERD關(guān)系不密切的功能性消化不良(FD)幾種不同疾病狀態(tài)下DIS的變化。 2.對象與方法 (1)研究對象及入選標(biāo)準(zhǔn)：病例選自在我院消化專科門診就診者，各種疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)如下：GERD患者是以燒心癥狀為主訴，伴或不伴反流，癥狀持續(xù)或反復(fù)發(fā)作超過3個月，就診前2周發(fā)作頻率≥3天/周。GERD各亞組診斷標(biāo)準(zhǔn)如下： ①EE：內(nèi)鏡診斷洛杉磯標(biāo)準(zhǔn)A-B級； ②伴有病理性酸反流的NER

12、D：內(nèi)鏡下食管黏膜正常，24小時食管pH監(jiān)測結(jié)果提示病理性酸反流，PPI試驗陽性； ③不伴病理性酸反流的NERD：內(nèi)鏡下食管黏膜正常，24小時食管pH監(jiān)測結(jié)果提示生理性酸反流，PPI試驗陽性。 (2)排除標(biāo)準(zhǔn)：同第一部分。 (3)研究方法： ①內(nèi)鏡檢查、24 h食管pH監(jiān)測、食管黏膜組織學(xué)及超微結(jié)構(gòu)檢查方法：同第一部分。 ② 24 h食管膽汁監(jiān)測：采用Bilitec 2000 24 h膽汁監(jiān)測儀，

13、食道PH探頭和膽汁監(jiān)測探頭均位于L,ES上方5cm。導(dǎo)管插入和固定完畢后，同步啟動pH和膽汁監(jiān)測儀開始記錄數(shù)據(jù)。將膽紅素光吸收值>0.14的時間百分比≥1.9﹪定為病理性膽汁反流。 ③ PPI試驗：埃索美拉唑(耐信)40mg/d、每天1次、早餐前30分鐘服用，治療2周。患者逐日在日志卡上記錄每日癥狀程度和頻率，程度及頻率評分標(biāo)準(zhǔn)同第一部分。陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：療程第8～14天內(nèi)燒心癥狀完全消失。 ④統(tǒng)計方法：應(yīng)用SPSS

14、13.0統(tǒng)計軟件計算各項觀察指標(biāo)的均數(shù)和標(biāo)淮差，多組間比較采用多個獨立樣本的非參數(shù)檢驗(K tndenpendent．Samples Test)，各組間DIS數(shù)值的比較時，先將觀察值進行編秩，經(jīng)方差齊性分析后，采用方差分析及Student-Newman-Keuls法檢驗，p<0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。 3.結(jié)果 (1)一般資料進入研究的GERD患者共31例，其中EE組9例(48±16歲，男：女為8∶1)、NERD pH+組

15、12例(43±11歲，男：女為9∶3)、NERD pH-組10例(34±10歲，男：女為4∶6)。FH組11例(40±8歲，男：女為4∶7)，F(xiàn)D組10例(37±8歲，男：女為5∶5)，正常對照組15例(42±12歲，男：女為7∶8)。 (2) 食管黏膜的組織學(xué)改變按Ismail-Beigi分類，除EE組6例中2例，NERD pH+組和NERD pH-組各1例有輕度炎癥外，其余所有病例及正常對照者食管黏膜組織學(xué)改變均在正常范圍

16、。 (3) 不同疾病組間食管黏膜細(xì)胞間隙寬度的比較正常對照組、FD組、EE組、NERD pH+組、NERD pH-組及FH組的DIS(x±SD)分別為(0.67±0.04)μm、(0.65±0.04)μm、(1.33±012)μm、(1.45±0.15)μm、(1.38±0.17)μm和(1.47±0.24)μm。 EE、NERD pH+、NERDpH-及FH組的DIS均顯著高于對照組(p值均為0.000。)，上述4組每組DI

17、S均值都為對照組的2倍以上，且每例DIS值與對照組每例DIS值無重疊。上述4組組間的DIS比較無統(tǒng)計學(xué)差異(p=0.275)。FD組的細(xì)胞間隙寬度與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.101)，且顯著低于上述4組(p=0.000)。 (4) 膽汁反流對食管黏膜上皮細(xì)胞間隙寬度的影響根據(jù)24小時pH和膽汁同步監(jiān)測結(jié)果，將NERD和EE患者分為pH+Bile+組(11例)、pH+Bile-組(8例)、pH-Bile+組(5例)、p