何首烏醇提液對LPS誘導(dǎo)致大鼠肝損傷機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　本論文旨在建立一種與臨床特征更為接近的何首烏致大鼠肝損傷動物模型，并在此模型基礎(chǔ)上探討何首烏醇提液致大鼠肝臟藥物代謝酶細(xì)胞色素P450(CYP450)的表達(dá)調(diào)節(jié)作用；接著對固有免疫炎癥信號通路Toll樣受體4（TLR4）介導(dǎo)的MyD88依賴性信號通路和非依賴性（TRIF）信號通路下游相關(guān)因子的表達(dá)與何首烏肝毒性作用機(jī)制的相關(guān)性進(jìn)行探究。
　　方法：
　　雄性SD大鼠130只，隨機(jī)分為8組：空白對照組(con

2、trol，20只)，脂多糖組(LPS，20只)，對乙酰氨基酚組(APAP，15只)，LPS+對乙酰氨基酚組(LPS+APAP，15只)，何首烏低劑量組(PMT-L，15只)、LPS+何首烏低劑量組(LPS+PMT-L，15只)、何首烏高劑量組(PMT-H，15只)和LPS+何首烏高劑量組(LPS+PMT-H，15只)。尾靜脈注射4mg/kg體重的誘導(dǎo)劑LPS，2h后，APAP組和LPS+APAP組大鼠分別按組別灌胃給予625mg/kg對

3、乙酰氨基酚，PMT-L和LPS+PMT-L組給予6g/kg何首烏，PMT-H和LPS+PMT-H組給予12g/kg何首烏，每日一次，連續(xù)給藥7d。每天觀察大鼠體重變化，在造模過程中，第2h、14h、5d和8d對各個劑量組大鼠腹主動脈采血，檢測肝功能生化指標(biāo)；解剖，記錄肝重；HE染色組織病理學(xué)檢查；熒光法測定肝細(xì)胞中細(xì)胞色素CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1酶活性的變化；提取肝臟總RNA，采用Realtime-PCR法檢測這三種亞酶

4、及MyD88、NF-KB P65、TRIF、IRF-3 mRNA表達(dá)情況，并應(yīng)用Western blot法檢測CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1、TLR-4、MyD88、NF-KB P65、TRIF、IRF-3蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　大鼠經(jīng)LPS誘導(dǎo)后，與空白對照組相比，體重下降，肝臟系數(shù)升高；第2h和14h，LPS組、LPS+APAP組和LPS+PMT-L/-H組ALT、AST和ALP含量顯著升高；組織病理

5、學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)，大鼠尾靜脈注射LPS誘導(dǎo)2h后，肝實質(zhì)微小肉芽腫，隨著給藥時間的延長，LPS組大鼠肝損傷逐漸恢復(fù)，于第8天發(fā)現(xiàn)，LPS組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞質(zhì)稍紅染變性，LPS+APAP組和LPS+PMT高低劑量組肝細(xì)胞灶狀壞死，伴炎細(xì)胞浸潤。何首烏醇提液組能明顯降低大鼠肝臟CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1酶的活性；RT-PCR法測定發(fā)現(xiàn)何首烏醇提液能顯著降低大鼠肝臟CYP1A2 mRNA表達(dá)，顯著升高大鼠肝臟CYP3A1、T

6、LR-4、MyD88、NF-kB P65、TRIF、IRF-3mRNA的表達(dá)，而對CYP2E1 mRNA表達(dá)沒有顯著影響；Western-blotting法檢測發(fā)現(xiàn)，何首烏醇提液能顯著降低大鼠肝臟CYP1A2蛋白的表達(dá)，而對CYP2E1和CYP3A1蛋白表達(dá)沒有顯著變化，能顯著升高大鼠肝臟TLR-4、MyD88、NF-kB P65、TRIF、IRF-3蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　以LPS為誘導(dǎo)劑可以很好地模擬臨床何首烏特異