何首烏飲減輕Aβ誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)元損傷作用機制的研究.pdf

1、阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease，AD）是一種常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，隨著當(dāng)今世界人口的老齡化，AD發(fā)病率日益增高，世界上有3500多萬人患有阿爾茨海默病，并且患者的死亡率日益增加，因此有關(guān)此病的研究成為國內(nèi)外的熱點之一。阿爾茨海默病其病理特征表現(xiàn)為神經(jīng)細胞內(nèi)出現(xiàn)神經(jīng)纖維纏結(jié)（過度磷酸化的Tau蛋白是其主要成分）以及細胞外存在老年斑，且主要分布在前皮質(zhì)和海馬區(qū)。老年斑的主要成分是Aβ(β-淀粉樣蛋白)，是由β淀

2、粉樣前體蛋白（Amyloid prescursor protein APP）被β位點APP裂解酶剪切所生成，Aβ是AD患者發(fā)病的和病程進展的主要因素，聚合態(tài)的Aβ可導(dǎo)致神經(jīng)細胞凋亡。細胞凋亡是海馬神經(jīng)元損傷的主要因素，已有研究表明以何首烏為主藥組成的多種中成藥對大鼠的學(xué)習(xí)記憶有保護作用，廣泛用于抗衰老。但何首烏飲對Aβ誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)元損傷的保護作用機制尚未見報道。
　　目的：
　　探討何首烏飲對Aβ誘導(dǎo)的大鼠原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)

3、元損傷保護作用及可能機制。
　　方法：
　　1.采用新生24h內(nèi)的SD大鼠進行原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元。
　　2.將培養(yǎng)10d的海馬神經(jīng)元分為以下五組：模型組：神經(jīng)元培養(yǎng)8d后，在培養(yǎng)液中加入終濃度為10μmol/L的Aβ1-40培養(yǎng)48h；何首烏飲保護組：神經(jīng)元培養(yǎng)6d后，在培養(yǎng)液中加入10%的何首烏飲含藥血清，預(yù)處理48h，再加入終濃度為10μmol/L的Aβ1-40培養(yǎng)48h；何首烏飲治療組：神經(jīng)元培養(yǎng)6d后，再加入終

4、濃度為10μmol/L的Aβ1-40培養(yǎng)48h，再在培養(yǎng)液中加入10%的何首烏飲含藥血清，處理48h；何首烏飲對照組：神經(jīng)元培養(yǎng)8d后，10%的何首烏飲含藥血清培養(yǎng)48h;空白對照組：神經(jīng)元培養(yǎng)10d，不做任何處理。
　　3.采用臺盼藍染色觀察海馬神經(jīng)元存活率的變化：死細胞被染成藍色，活細胞不著色，用未染色活細胞總數(shù)在總細胞數(shù)中所占百分比來評價何首烏飲對Aβ誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)元存活率的作用。
　　4.采用Hoechst33258

5、染色觀察海馬神經(jīng)元的凋亡率：海馬神經(jīng)元培養(yǎng)10d后進行Hoechst33258染色，在熒光顯微鏡下觀察細胞的核染情況，隨機選取10個視野，計數(shù)細胞凋亡率。
　　5.檢測各組海馬神經(jīng)元Trx1的表達情況：免疫組化染色觀察Trx1的表達；用RT-PCR檢測各組Trx1的mRNA表水平，并用Western blot檢測各組Trx1蛋白的水平。
　　結(jié)果：
　　1.細胞形態(tài)改變空白對照組和何首烏飲對照組神經(jīng)元生長旺盛，胞體大，

6、邊界清楚，突起長，分枝連接呈網(wǎng)狀；與正常組比較，模型組細胞貼壁不牢，失去原有形態(tài)，胞體腫脹，細胞膜破裂，周圍有許多細胞碎片，突起大部分?jǐn)嗔殉蓴嗑€狀；何首烏飲治療組和預(yù)防組細胞狀態(tài)與模型組相比較神經(jīng)元的胞體較為完整，大部分細胞有突起，且突起間有聯(lián)接。
　　2.細胞存活率的變化臺盼藍染色觀察模型組存活率與空白對照組比較明顯降低（P<0.05），何首烏飲治療組和預(yù)防組與模型組比較存活率明顯增高（P<0.05），何首烏飲治療組和預(yù)防組與空

7、白對照組比較沒有顯著性差異（P>0.05），何首烏飲治療組和預(yù)防組比較也沒有顯著性差異（P>0.05）。
　　3.Hoechst33258染色與空白對照組比較，模型組的凋亡率明顯增加（P<0.05），與模型組比較，何首烏飲治療組和預(yù)防組的凋亡率明顯降低（P<0.05）。何首烏飲治療組和預(yù)防組與空白對照組比較沒有顯著性差異（P>0.05），何首烏飲治療組和預(yù)防組比較也沒有顯著性差異（P>0.05）。
　　4.細胞免疫染色結(jié)果T

8、rx1陽性物質(zhì)呈棕色，位于細胞質(zhì)。染色結(jié)果顯示與空白對照組比較，模型組Trx1的表達明顯降低（P<0.05）；與模型組比較，何首烏飲治療組和預(yù)防組Trx1表達明顯升高（P<0.05）,與空白組比較，何首烏飲治療組和預(yù)防組Trx1的表達明顯升高（P<0.05），何首烏飲治療組和何首烏飲預(yù)防組比較Trx1表達沒有顯著性差異（P>0.05）。
　　5.Trx1蛋白和mRNA表達結(jié)果組（P<0.05），模型組明顯低于空白對照組（P<0.0