火棘果活性成分分析制備及其制劑基質(zhì)研究.pdf

1、火棘[Pyracantha fortuneana(Maxim.)Li]為薔薇科（Rosaceae）蘋果亞科（Maloideae）火棘屬（Pyracantha Roem.）常綠野生灌木，史載及現(xiàn)代研究表明，火棘果具有健脾
　　消積、降血脂、抗氧化及美白等功效，但目前國內(nèi)外對火棘果功效及其物質(zhì)基礎尚缺乏系統(tǒng)研究。本文在建立火棘果主要活性成分含量檢測方法的基礎上，優(yōu)化了火棘果皮肉及果籽中有效成分的同步提取制備工藝，同時建立了基于DPPH

2、總抗氧化能力評價為導向的鮮果制備高抗氧化活性提取物的工藝，并進一步建立了火棘果總黃酮、多糖的分離純化制備工藝，在進行抗腫瘤活性初篩基礎上，重點研究了火棘果總黃酮體外抗腫瘤活性及其可能機制。此外，還針對火棘果產(chǎn)品開發(fā)的凝膠制劑基質(zhì)中各成分相互作用進行了研究。主要取得了如下研究結果：
　?。?）建立了火棘果主要活性成分含量的分析方法。采用香草醛-鹽酸法測定火棘果總原花青素含量、AlCl3比色法測定總黃酮以及HPLC法檢測多種黃酮含量；

3、采用響應面法優(yōu)化改良硫酸-苯酚法及福林酚法分別檢測火棘果多糖與總酚含量。同時，建立了DPPH法體外抗氧化評價體系并顯著提高了該方法的穩(wěn)定性。
　?。?）分別建立并優(yōu)化了基于火棘果果皮肉、果籽和整果的主要功效物質(zhì)的提取工藝。以果皮肉為原料，分別采用常規(guī)水提法、復合酶解預處理+乙醇回流提取、硫酸-乙醇法依次提取多糖、總黃酮及不可萃取多酚，經(jīng)響應面法優(yōu)化提取工藝，火棘果多糖、總黃酮及不可萃取多酚的得率分別為12.87％，0.91%及16

4、.73%；以果籽為原料，利用正己烷、硫酸-乙醇為溶劑依次提取籽油及不可萃取多酚，在優(yōu)化條件下，籽油及不可萃取多酚的得率分別為10.24%及7.08%；以整果為原料，以DPPH總抗氧化能力為提取導向指標，優(yōu)化了提取工藝并得到抗氧化活性高的提取物。
　?。?）采用HPD-100C型大孔樹脂純化火棘果總黃酮，優(yōu)化了的純化工藝使火棘果總黃酮純化后含量上升為原來的2.3倍，回收率高達88.9%；對火棘果多糖進行了分級醇沉，并比較了其抗氧化活

5、性，發(fā)現(xiàn)乙醇濃度由低到高逐級醇沉時，50%（V/V）乙醇醇沉得到的多糖量最多，而70%（V/V）乙醇醇沉得到的多糖抗氧化活性最強。
　?。?）利用體外細胞培養(yǎng)體系，在對上述分離純化的火棘果主要活性物質(zhì)的抗腫瘤初篩基礎上，研究了火棘果類黃酮提取物的體外抗腫瘤活性。結果表明，類黃酮提取物能有效抑制小鼠B16黑色素細胞、人肝癌細胞HepG2及人宮頸癌細胞Hela的增殖，且對抑制細胞增殖具有時間-劑量依賴性。進一步研究了火棘果類黃酮提取物

6、誘導HepG2細胞的凋亡作用，發(fā)現(xiàn)當火棘果類黃酮提取物濃度低于1600μg/mL時，誘導HepG2細胞的早期凋亡率和總凋亡率隨劑量增加而增加；而當濃度高于1600μg/mL后，細胞凋亡率下降。
　?。?）采用流變學方法及差示掃描量熱（DSC）技術對羅望子木葡聚糖（TSX）-沒食子酸（GA）類似物體系的物質(zhì)結構-膠凝相關性進行了研究，發(fā)現(xiàn)GA酯鍵部分是誘導TSX膠凝的主要結構單元，進一步通過核磁共振（NMR）技術探討了其膠凝機理，為