Peroxiredoxin6及其相關(guān)iPLA2活性在腦缺血再灌注中所起作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、背景：
　　氧化應(yīng)激是造成腦缺血再灌注損傷的關(guān)鍵因素。內(nèi)源性抗氧化系統(tǒng)含有谷胱甘肽還原酶系統(tǒng)、超氧化物岐化酶(SOD)系統(tǒng)、抗氧化蛋白Peroxiredoxins(Prdxs)系統(tǒng)、硫氧還蛋白/硫氧還蛋白還原酶系統(tǒng)(Trx/TrxR)等等。Prdx6蛋白具有非硒依賴性谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(NSGPx)和非鈣依賴性磷脂酶(iPLA2)雙重活性。帕金森病、雅克病、匹克病、肺惡性間皮細(xì)胞瘤、鱗狀上皮細(xì)胞癌、皮膚傷口愈合區(qū)、實(shí)驗(yàn)性早衰細(xì)胞等

2、都已發(fā)現(xiàn)與Prdx6蛋白的表達(dá)有關(guān)，且多與Prdx6的過(guò)氧化物酶活性，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化有關(guān)。目前，對(duì) Prdx6-iPLA2活性在腦缺血疾病中的作用卻研究甚少。
　　目的：
　　探討Peroxiredoxin6(Prdx6)及其相關(guān)iPLA2活性在腦缺血再灌注損傷中的作用及其機(jī)制。
　　方法：
　?、賹⒋笫箅S機(jī)(n=16)分為 Sham組、MCAO組、Scramble組、Prdx6-siRNA組和MJ33組；

3、>　?、跇?gòu)建化學(xué)合成的Prdx6-siRNA一條，亂序Prdx6-siRNA一條作為陰性對(duì)照。Prdx6-siRNA組側(cè)腦室注射8μl的 Prdx6-siRNA， Prdx6-siRNA+MJ33組側(cè)腦室注射8μl的 Prdx6-siRNA并尾靜脈注射MJ33(0.5μmol/kg)，Scramble組側(cè)腦室注射其亂序 siRNA，余兩組均只進(jìn)行定位后顱骨鉆孔，并不注射；
　?、蹅?cè)腦室注射24h后采用中腦動(dòng)脈栓塞（MCAO）模型誘

4、導(dǎo)SD大鼠左側(cè)腦皮質(zhì)缺血再灌注，其中Sham組僅做手術(shù)切口，不插入線栓；
　?、苣X缺血再灌注損傷24h時(shí)，測(cè)定各組神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分、腦含水量和腦梗死體積，并通過(guò)WB和Real-time qPCR測(cè)腦組織中Prdx6， ELISA檢測(cè)各組iPLA2活性；
　?、萃ㄟ^(guò) HE和亞甲藍(lán)染色法檢測(cè)大腦皮質(zhì)缺血再灌注區(qū)神經(jīng)元的損傷情況；
　?、尥ㄟ^(guò)檢測(cè)SOD活性和MDA含量來(lái)評(píng)價(jià)各組的氧化活性，并通過(guò)WB、real-time qPC

5、R檢測(cè)caspase3，結(jié)合TUNLE染色探討相關(guān)凋亡情況；
　?、咄ㄟ^(guò)WB檢測(cè)各組炎癥相關(guān)TLR2/4信號(hào)通路的NF-?B、iNOS、COX2蛋白的表達(dá)水平，ELISA檢測(cè)IL-1β、IL-17和IL-23的含量。
　　結(jié)果：
　　①神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分、缺血側(cè)腦含水量和腦梗死體積：與MCAO組比， Prdx6-siRNA組和 Prdx6-siRNA+MJ33組均明顯增加， Prdx6-siRNA+MJ33組與Prdx6-

6、siRNA組比有所減少，且各變化均具有統(tǒng)計(jì)意義；
　　②Prdx6的表達(dá)及iPLA2活性：與MCAO組比，Prdx6-siRNA組和 Prdx6-siRNA+MJ33組均明顯降低， Prdx6-siRNA+MJ33組與Prdx6-siRNA組比進(jìn)一步減少，且各變化均具有統(tǒng)計(jì)意義；
　?、跦E和亞甲藍(lán)染色顯示腦缺血區(qū)神經(jīng)元損傷：與MCAO組比， Prdx6-siRNA組和Prdx6-siRNA+MJ33組均明顯增加，Prdx6

7、-siRNA
　　+MJ33組與Prdx6-siRNA組比有所減少，且各變化具有統(tǒng)計(jì)意義；
　?、躍OD活性和 MDA含量：與 MCAO組比，Prdx6-siRNA組和Prdx6-siRNA+MJ33組SOD活性均明顯減少，MDA含量均顯著增加， Prdx6-siRNA+MJ33組與Prdx6-siRNA組比SOD活性有所增加，MDA含量有所減少，且各變化具有統(tǒng)計(jì)意義；
　?、軹UNLE染色和caspase3表達(dá)：與M

8、CAO比，Prdx6-siRNA組和Prdx6-siRNA+MJ33組均明顯增加， Prdx6-siRNA+MJ33組與Prdx6-siRNA組比有所減少，且各項(xiàng)變化具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
　?、奕毖笱装Y相關(guān)TLR2/4通路各因子的表達(dá)：與MCAO組比， Prdx6-siRNA組和 Prdx6-siRNA+MJ33組各蛋白含量均明顯增加， Prdx6-siRNA+MJ33組與Prdx6-siRNA組比有所減少，且各變化具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。