AT2受體在腦缺血再灌注中的作用及其機制的研究.pdf

1、目的:腦缺血再灌注損傷（cerebral ischemia reperfusion injury，CIRI）是指缺血腦組織重新獲得血供后，腦細胞功能代謝障礙及結(jié)構(gòu)破壞進一步加重的現(xiàn)象，是由多種機制參與的可引起一系列細胞、分子及其調(diào)節(jié)過程變化的復(fù)雜的病理生理過程。
　　血管緊張素Ⅱ(Angiotensin，AngⅡ)是腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS)一

2、種重要的多功能血管活性物質(zhì)，可作用于特異的膜結(jié)合受體上，目前所知的RAAS的生物效應(yīng)幾乎均通過AngⅡ與相應(yīng)的受體作用，其受體分為AngⅡ1型受體(AT1受體)和AngⅡ2型受體(AT2受體)兩種。在許多情況下，AngⅡ與AT2受體結(jié)合和AngⅡ與AT1受體結(jié)合所介導(dǎo)的生物學效應(yīng)及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路具有拮抗作用，如增殖/抗增殖，細胞分裂/分化和凋亡，血管收縮/舒張。在未成熟的大腦，AT2受體表達豐富且分布廣泛，主要集中在與運動、感覺、學習相關(guān)

3、的中樞區(qū)域及邊緣系統(tǒng)的某些結(jié)構(gòu)，但在成年大鼠中，這些部位的AT2受體顯著減少。既往研究表明，在神經(jīng)組織內(nèi)AT2受體可以促進細胞的分化和再生，從而促進神經(jīng)功能的恢復(fù)。
　　本研究首先建立大鼠大腦中動脈閉塞(middle carotid artery occlusion，MCAO)模型，觀察腦缺血再灌注損傷后腦組織中AT2受體的表達情況及相關(guān)因子的變化，探討AT2受體在腦缺血再灌注損傷中的作用及其可能的機制，并進一步探討坎地沙坦(Ca

4、ndesartan)對腦缺血再灌注損傷的影響和可能的機制，從而為腦缺血再灌注損傷提供新的治療方向和理論依據(jù)。
　　實驗方法:
　　1.建立MCAO模型。
　　2.TTC染色檢測腦梗死體積。
　　3.免疫組化法檢測腦組織AT2受體、IL-1β、TNF-α、IL-10、c-fos、c-jun及大腦中動脈PCNA、α-SM-actin的表達。
　　4.HE染色檢測大腦中動脈橫斷面內(nèi)膜、中膜面積并做內(nèi)膜與中膜面積比

5、。
　　5.Real-time PCR檢測腦組織Bcl-2 mRNA、Bax mRNA的表達。
　　6.Western blot檢測腦組織Bcl-2、Bax蛋白的表達。
　　7.統(tǒng)計學處理:采用SPSS11.5軟件進行統(tǒng)計學分析，所有數(shù)據(jù)以均值±標準差表示，采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　實驗結(jié)果:
　　1.免疫組化法檢測AT2受體表達變化說明AT2受體參與了腦缺血再灌注過程:再灌注1天時

6、腦組織中AT2受體表達量開始上升(P＜0.05)，于第7天達高峰，第10天表達量逐漸下降。
　　2.免疫組化法檢測IL-1β、TNF-α和IL-10表達變化說明免疫炎癥反應(yīng)參與了腦缺血再灌注過程:與sham組比較，I/R組腦組織中IL-1β表達增加(P＜0.05)，TNF-α表達增加(P＜0.05)，IL-10表達增加(P＜0.05)。
　　3.免疫組化法檢測大腦中動脈PCNA和α-SM-actin表達變化，HE染色檢測大腦

7、中動脈橫斷面內(nèi)膜、中膜面積并做內(nèi)膜與中膜面積比(I/M)說明腦缺血再灌注可引起缺血動脈內(nèi)膜增生，進而導(dǎo)致血運重建后血管狹窄的發(fā)生:與sham組比較，I/R組缺血側(cè)大腦中動脈PCNA表達增加(P＜0.05)，α-SM-actin表達減少(P＜0.05); I/R組缺血側(cè)大腦中動脈橫截面的I/M值增大(P＜0.05)。
　　4.免疫組化法檢測c-fos、c-jun表達變化，RT-PCR檢測Bcl-2mRNA、BaxmRNA及Weste

8、rn blot檢測Bcl-2、Bax蛋白的表達變化說明細胞凋亡參與了腦缺血再灌注過程:與sham組比較，I/R組腦組織中Bcl-2mRNA的相對表達量減少(P＜0.05)，BaxmRNA的相對表達量增多(P＜0.05);Bcl-2蛋白的相對表達量減少(P＜0.05)，Bax蛋白的相對表達量增多(P＜0.05);c-fos表達增加(P＜0.05)，c-jun表達增加(P＜0.05)。
　　5.免疫組化法檢測不同組AT2受體表達變化及

9、TTC染色檢測腦梗死體積說明AT2受體在腦缺血再灌注過程中起保護作用:給予CGP42112處理后腦組織中AT2受體表達量增加（*P＜0.05 vs.Control組），給予PD123319處理后腦組織中AT2受體表達量減少（＃P＜0.05 vs.Control組）;給予CGP42112處理后腦梗死體積縮?。?P＜0.05 vs.Control組）;給予PD123319處理后腦梗死體積擴大(＃P＜0.05 vs.Control組)。

10、>　　6.免疫組化法檢測不同組IL-1β、TNF-α和IL-10表達變化說明再灌注損傷后AT2受體通過抑制免疫炎癥反應(yīng)起神經(jīng)保護作用:給予CGP42112處理后腦組織中IL-1β表達減少（*P＜0.05 vs.Control組），TNF-α表達減少(*P＜0.05vs.Control組)，IL-10表達增加（*P＜0.05 vs.Control組）;給予PD123319處理后腦組織中IL-1β表達增加（＃P＜0.05 vs.Contro

11、l組），TNF-α表達增加(＃P＜0.05 vs.Control組)，IL-10表達減少（＃P＜0.05 vs.Control組）。
　　7.免疫組化法檢測不同組大腦中動脈PCNA和α-SM-actin表達變化，HE染色檢測大腦中動脈橫斷面的內(nèi)膜、中膜面積并做內(nèi)膜與中膜面積比(I/M)說明再灌注損傷后AT2受體通過抑制血運重建后血管狹窄的發(fā)生起神經(jīng)保護作用:給予CGP42112處理后，缺血側(cè)大腦中動脈PCNA表達減少（*P＜0.0

12、5 vs.Control組），α-SM-actin表達增加（*P＜0.05 vs.Control組），給予PD123319處理后缺血側(cè)大腦中動脈PCNA表達增加（＃P＜0.05 vs.Control組），α-SM-actin表達減少(＃P＜0.05 vs.Control組);給予CGP42112處理后動脈橫截面的I/M值減小(*P＜0.05 vs.Control組);給予PD123319處理后動脈橫截面的I/M值增大(＃P＜0.05vs

13、.Control組)。
　　8.免疫組化法檢測不同組c-fos、c-jun表達變化，RT PCR檢測Bel-2mRNA、BaxmRNA及Western blot檢測Bcl-2、Bax蛋白的表達變化說明再灌注損傷后AT2受體通過抑制神經(jīng)細胞的凋亡起神經(jīng)保護作用:給予CGP42112處理后腦組織中Bcl-2mRNA的相對表達量增加（*P＜0.05 vs.Control組），BaxmRNA的相對表達量減少（*P＜0.05 vs.Cont

14、rol組），給予PD123319處理后腦組織中Bcl-2mRNA的相對表達量減少（＃P＜0.05 vs.Control組），BaxmRNA的相對表達量增加(＃P＜0.05 vs.Control組);給予CGP42112處理后腦組織中Bcl-2蛋白的相對表達量增加（＃P＜0.05 vs.Control組），Bax蛋白的相對表達量減少(＃P＜0.05vs.Control組);給予PD123319處理后腦組織中Bcl-2蛋白的相對表達量減少(

15、*P＜0.05 vs.Control組)，Bax蛋白的相對表達量增加（*P＜0.05 vs.Control組）。
　　9.免疫組化法檢測不同組AT2受體表達變化及TTC染色檢測腦梗死體積說明再灌注損傷后Candesartan可通過促進AT2受體的表達起神經(jīng)保護作用:給予 Candesartan處理后腦組織中AT2受體表達量增加(P＜0.05);腦梗死體積縮小(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.腦缺血再灌注后，腦組織