LLDT-8對腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　研究雷滕舒((5R)-5-hydroxytriptolide,LLDT-8)對小鼠腦缺血再灌注損傷是否具有保護(hù)作用，探索LLDT-8通過調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)保護(hù)缺血性腦損傷的機(jī)制。
　　方法：
　　建立小鼠局暫性大腦中動脈栓塞模型（transient middle cerebral artery occlusion，tMCAO），研究LLDT-8在0.5mg/kg及1mg/kg劑量下對急性局灶性腦缺

2、血再灌注損傷的作用。通過2,3,5-triphenyltetrazolium chloride（TTC）染色測定腦梗死體積。Real-timePCR檢測皮層梗死半暗區(qū)與炎癥反應(yīng)相關(guān)的細(xì)胞因子和酶如TNF-α、IL-1β及iNOS的表達(dá)。ELISA檢測皮層勻漿后IL-10的蛋白表達(dá)變化。為了確定LLDT-8的體外作用，我們培養(yǎng)了小膠質(zhì)細(xì)胞系BV-2,檢測LLDT-8對脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)BV-2產(chǎn)生的

3、TNF-α、IL-1β及iNOS mRNA表達(dá)水平的影響；通過ELISA檢測細(xì)胞上清中TNF-α蛋白水平變化；Griess法檢測細(xì)胞上清中NO釋放量；MTT法檢測細(xì)胞活力。免疫熒光法研究LLDT-8對LPS誘導(dǎo)的BV-2細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子（NF-κB）核轉(zhuǎn)位的影響；western-blot檢測細(xì)胞IκBα的磷酸化。利用MTT法檢測 LLDT-8作用于LPS誘導(dǎo)的BV-2細(xì)胞后的條件培養(yǎng)基對海馬神經(jīng)元細(xì)胞系HT22的保護(hù)作用。培養(yǎng)原代小膠質(zhì)細(xì)

4、胞，研究LLDT-8對LPS誘導(dǎo)的原代小膠質(zhì)細(xì)胞NO釋放量及TNF-α、IL-1β及iNOSmRNA表達(dá)水平的影響。MTT法檢測LLDT-8作用于LPS誘導(dǎo)的原代小膠質(zhì)細(xì)胞后的條件培養(yǎng)基對原代神經(jīng)元的保護(hù)作用。
　　結(jié)果：
　　與溶劑對照組相比，LLDT-8在0.5mg/kg和1mg/kg劑量下均能明顯減少小鼠tMCAO后腦梗死體積（P<0.01），同時，LLDT-8顯著降低皮層缺血半暗帶TNF-α、IL-1β和iNOS m

5、RNA表達(dá)（P<0.05），但其對IL-10的蛋白表達(dá)量無顯著影響。體外實(shí)驗表明，LLDT-8顯著降低了由LPS誘導(dǎo)BV-2產(chǎn)生的TNF-α、IL-1β及iNOS mRNA表達(dá)水平（P<0.05），且呈劑量依賴性；LLDT-8能夠顯著降低LPS誘導(dǎo)的BV-2細(xì)胞NO的釋放及TNF-α的分泌（P<0.05）；LLDT-8顯著抑制NF-κB入核及Iκ Bα的磷酸化（P<0.05）；MTT的結(jié)果顯示，用LLDT-8處理LPS刺激的BV-2細(xì)胞

6、后收集的條件培養(yǎng)基與單獨(dú)用LPS刺激的BV2條件培養(yǎng)基培養(yǎng)海馬神經(jīng)元細(xì)胞系HT22，前者與后者相比能夠顯著提高HT22細(xì)胞活力（P<0.01）。RT-PCR結(jié)果顯示，LLDT-8可顯著抑制 LPS誘導(dǎo)的原代小膠質(zhì)細(xì)胞NO釋放（P<0.01）,并且可顯著降低TNF-α、IL-1β及iNOS mRNA表達(dá)水平（P<0.01）。LLDT-8作用于LPS誘導(dǎo)的原代小膠質(zhì)細(xì)胞后的條件培養(yǎng)基對原代神經(jīng)元具有保護(hù)作用（P<0.05）。
　　結(jié)論