藻藍(lán)蛋白對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：探討藻藍(lán)蛋白對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。方法：用線(xiàn)栓法制作大鼠左側(cè)大腦中動(dòng)脈阻塞再灌注模型(MCAO)，分別對(duì)假手術(shù)組、模型對(duì)照組、藻藍(lán)蛋白組進(jìn)行神經(jīng)功能缺失評(píng)分，用TTC染色法測(cè)量腦梗死體積，用干濕重法計(jì)算腦的含水量，應(yīng)用原位末端標(biāo)記(TUNEL)觀察腦缺血再灌注不同時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)元凋亡的變化。結(jié)果：(1)在大鼠腦缺血再灌注后2h應(yīng)用藻藍(lán)蛋白，能夠明顯改善神經(jīng)功能缺失癥狀，腦缺血再灌注后24h，藻藍(lán)蛋白組的Bederson神經(jīng)

2、功能評(píng)分明顯低于模型對(duì)照組，且這種差異一直持續(xù)到腦缺血再灌注后48h。藻藍(lán)蛋白還能夠減少腦的梗死體積，腦缺血再灌注后48h，藻藍(lán)蛋白組的腦梗死體積明顯低于模型對(duì)照組。藻藍(lán)蛋白還能夠減輕腦水腫，使腦組織的含水量明顯減少。(2)模型對(duì)照組，腦缺血再灌注后凋亡神經(jīng)元主要分布于缺血周?chē)鷧^(qū)，隨著再灌注時(shí)間的延長(zhǎng)凋亡細(xì)胞數(shù)逐漸增加，至24h達(dá)高峰，2d開(kāi)始下降，14d時(shí)仍高于假手術(shù)組。藻藍(lán)蛋白組凋亡細(xì)胞的數(shù)量相對(duì)較少，其變化規(guī)律與模型對(duì)照組相似，同

3、一時(shí)間點(diǎn)相比較，藻藍(lán)蛋白組均顯著低于模型對(duì)照組。結(jié)論：腦缺血再灌注后，缺血周?chē)鷧^(qū)神經(jīng)元的凋亡是一個(gè)動(dòng)態(tài)的漸進(jìn)過(guò)程。藻藍(lán)蛋白對(duì)腦缺血再灌注損傷有明顯的保護(hù)作用。 目的：探討藻藍(lán)蛋白對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注后CytCmRNA和Caspase-3mRNA表達(dá)的影響。方法：用線(xiàn)栓法制作大鼠左側(cè)大腦中動(dòng)脈阻塞再灌注模型(MCAO)，分別對(duì)假手術(shù)組、模型對(duì)照組、藻藍(lán)蛋白組進(jìn)行神經(jīng)功能缺失評(píng)分，用TTC染色法測(cè)量各層面腦梗死面積的百分比，應(yīng)用

4、原位雜交技術(shù)分別觀察腦缺血再灌注不同時(shí)間點(diǎn)CytCmRNA和Caspase-3mRNA的表達(dá)。結(jié)果：(1)假手術(shù)組雙側(cè)半球和模型對(duì)照組非缺血側(cè)腦組織神經(jīng)元CytCmRNA均有微弱表達(dá)。模型對(duì)照組缺血側(cè)腦組織神經(jīng)元CytCmRNA表達(dá)增強(qiáng)，主要位于皮層區(qū)和紋狀體區(qū)。在皮層區(qū)和紋狀體區(qū)，腦缺血再灌注后6h神經(jīng)細(xì)胞即出現(xiàn)CytCmRNA表達(dá)，隨著再灌注時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增強(qiáng)，在皮層區(qū)于12h達(dá)高峰，而在紋狀體區(qū)于24h達(dá)高峰，達(dá)高峰后表達(dá)均逐漸減

5、弱，至14d仍高于假手術(shù)組。藻藍(lán)蛋白組在皮層區(qū)和紋狀體區(qū)CytCmRNA表達(dá)的變化趨勢(shì)與模型對(duì)照組相似，但同一時(shí)間點(diǎn)相比，明顯低于模型對(duì)照組。(2)假手術(shù)組和模型對(duì)照組非缺血側(cè)腦組織可見(jiàn)到少量Caspase-3mRNA陽(yáng)性細(xì)胞。模型對(duì)照組，缺血再灌注6h后Caspase-3mRNA陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)開(kāi)始增加，至再灌注24h達(dá)高峰，2d后陽(yáng)性細(xì)胞逐漸減少，至14d時(shí)仍有表達(dá)，略高于假手術(shù)組，各相鄰時(shí)間點(diǎn)比較差異顯著。藻藍(lán)蛋白組Caspase-3陽(yáng)

6、性細(xì)胞的數(shù)量相對(duì)較少，其變化規(guī)律與模型對(duì)照組相似，同一時(shí)間點(diǎn)相比，藻藍(lán)蛋白組Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均顯著低于模型對(duì)照組。結(jié)論：腦缺血再灌注后，缺血周?chē)鷧^(qū)的神經(jīng)元內(nèi)CytCmRNA和Caspase-3mRNA均高表達(dá)，二者在局灶性腦缺血再灌注損傷中起重要作用。藻藍(lán)蛋白對(duì)腦缺血再灌注損傷有明顯的保護(hù)作用，藻藍(lán)蛋白可能通過(guò)減少CytCmRNA和Caspase-3mRNA的表達(dá)這一途徑來(lái)抵抗腦缺血再灌注損傷。 目的：探討藻藍(lán)蛋白對(duì)

7、大鼠局灶性腦缺血再灌注后MMP-2和MMP-9表達(dá)的影響。方法：用線(xiàn)栓法制作大鼠左側(cè)大腦中動(dòng)脈阻塞再灌注模型(MCAO)，分別對(duì)假手術(shù)組、模型對(duì)照組、藻藍(lán)蛋白組進(jìn)行腦含水量及EB含量的測(cè)定，用免疫組化技術(shù)分別觀察腦缺血再灌注后不同時(shí)間點(diǎn)MMP-2和MMP-9的表達(dá)。結(jié)果：(1)腦缺血再灌注后6h就可出現(xiàn)腦含水量增加，至2d達(dá)高峰，隨后開(kāi)始下降，14d時(shí)基本回到正常水平。應(yīng)用藻藍(lán)蛋白后腦含水量明顯減少。(2)腦缺血再灌注后6hEB含量就開(kāi)

8、始增加，然后呈下降趨勢(shì)，降至24h以后又增高，至2d時(shí)達(dá)高峰，隨后再逐漸下降，至14d時(shí)，腦EB含量明顯減少，與假手術(shù)組相比無(wú)顯著性差異。應(yīng)用藻藍(lán)蛋白后腦組織EB的含量降低。(3)假手術(shù)組和模型對(duì)照組非缺血側(cè)腦組織只有少量MMP-2陽(yáng)性細(xì)胞。模型對(duì)照組缺血側(cè)腦組織MMP-2陽(yáng)性細(xì)胞主要位于缺血區(qū)與周邊區(qū)。再灌注后24h可見(jiàn)MMP-2陽(yáng)性細(xì)胞開(kāi)始出現(xiàn)，3d～7d時(shí)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)達(dá)高峰，至14d時(shí)仍有表達(dá)，略高于假手術(shù)組。藻藍(lán)蛋白組的MMP-2

9、陽(yáng)性細(xì)胞的分布區(qū)域與模型對(duì)照組相同，其動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)與模型對(duì)照組相似，但同一時(shí)間點(diǎn)相比，明顯低于模型對(duì)照組。(4)假手術(shù)組和模型對(duì)照組非缺血側(cè)腦組織可見(jiàn)到少量MMP-9陽(yáng)性細(xì)胞。模型對(duì)照組缺血側(cè)腦組織MMP-9陽(yáng)性細(xì)胞也主要位于缺血區(qū)與周邊區(qū)。缺血再灌注后6h缺血區(qū)內(nèi)MMP-9陽(yáng)性細(xì)胞開(kāi)始出現(xiàn)，12h明顯增高，至2d達(dá)高峰，3d后陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)開(kāi)始減少，至14d時(shí)恢復(fù)到基礎(chǔ)水平，各相鄰時(shí)間點(diǎn)比較差異顯著。藻藍(lán)蛋白組的MMP-9陽(yáng)性細(xì)胞的分布區(qū)

10、域與模型對(duì)照組相同，其動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)與模型對(duì)照組相似，但同一時(shí)間點(diǎn)相比，明顯低于模型對(duì)照組。結(jié)論：腦缺血再灌注后，病變區(qū)MMP-2和MMP-9表達(dá)增加，二者在腦缺血再灌注后腦水腫方面起重要作用。藻藍(lán)蛋白可能通過(guò)影響MMP-2和MMP-9的表達(dá)這一途徑來(lái)減輕腦水腫，對(duì)腦缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用。 目的：探討藻藍(lán)蛋白對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注后COX-2及COX-2mRNA表達(dá)的影響。方法：用線(xiàn)栓法制作大鼠左側(cè)大腦中動(dòng)脈阻塞再灌注模型

11、(MCAO)，分別對(duì)假手術(shù)組、模型對(duì)照組、藻藍(lán)蛋白組進(jìn)行神經(jīng)功能缺失評(píng)分，用TTC染色法測(cè)量腦梗塞體積，應(yīng)用免疫組化和原位雜交技術(shù)分別觀察腦缺血再灌注后不同時(shí)間點(diǎn)COX-2及COX-2mRNA在神經(jīng)元中的表達(dá)情況。結(jié)果：(1)假手術(shù)組和模型對(duì)照組非缺血側(cè)腦組織可見(jiàn)到少量COX-2陽(yáng)性細(xì)胞。模型對(duì)照組COX-2陽(yáng)性細(xì)胞主要位于缺血周?chē)鷧^(qū)，而缺血中心區(qū)僅有少量陽(yáng)性細(xì)胞出現(xiàn)，缺血再灌注后6hCOX-2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)開(kāi)始增加，至再灌注24h達(dá)高峰，

12、2d后陽(yáng)性細(xì)胞逐漸減少，至14d時(shí)仍有表達(dá)，略高于假手術(shù)組。藻藍(lán)蛋白組COX-2陽(yáng)性細(xì)胞也主要位于缺血周?chē)鷧^(qū)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量相對(duì)較少，其變化規(guī)律與模型對(duì)照組相似，同一時(shí)間點(diǎn)相比較，藻藍(lán)蛋白組周?chē)鷧^(qū)COX-2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均顯著低于模型對(duì)照組。(2)假手術(shù)組和模型對(duì)照組非缺血側(cè)腦組織可見(jiàn)到少量COX-2mRNA的表達(dá)。模型對(duì)照組COX-2mRNA陽(yáng)性細(xì)胞主要位于缺血周?chē)鷧^(qū)，而缺血中心區(qū)陽(yáng)性細(xì)胞明顯減少。缺血再灌注6h后COX-2mRNA陽(yáng)性細(xì)胞

13、數(shù)逐漸增加，至再灌注12h達(dá)高峰，持續(xù)24h～3d，然后開(kāi)始下降，至14d時(shí)仍有表達(dá)，略高于假手術(shù)組；藻藍(lán)蛋白組COX-2mRNA陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量相對(duì)較少，其變化規(guī)律與模型對(duì)照組相似，與模型對(duì)照組同一時(shí)間點(diǎn)相比，具有顯著性差異。結(jié)論：腦缺血再灌注后，缺血周?chē)鷧^(qū)的神經(jīng)元內(nèi)COX-2及COX-2mRNA均高表達(dá)，其在局灶性腦缺血再灌注損傷中起重要作用。藻藍(lán)蛋白可能通過(guò)選擇性抑制COX-2及COX-2mRNA的表達(dá)這一途徑來(lái)抵抗腦缺血損傷，對(duì)腦缺

14、血再灌注損傷具有保護(hù)作用。 目的：觀察藻藍(lán)蛋白對(duì)缺氧/復(fù)氧后PC12細(xì)胞的活性及線(xiàn)粒體膜電位的影響。方法：將培養(yǎng)好的PC12細(xì)胞制成缺氧/復(fù)氧模型，分為未缺氧組、模型對(duì)照組和藻藍(lán)蛋白組。用MTT比色法檢測(cè)PC12細(xì)胞的OD值，觀察細(xì)胞的活性及數(shù)量的變化；用共聚焦顯微鏡測(cè)定被Rhodamine123標(biāo)記的PC12細(xì)胞內(nèi)的熒光強(qiáng)度，觀察線(xiàn)粒體膜電位的變化。結(jié)果：(1)缺氧/復(fù)氧后模型對(duì)照組和藻藍(lán)蛋白組的任意時(shí)間點(diǎn)的OD值均明顯低于未

15、缺氧組；藻藍(lán)蛋白組各時(shí)間點(diǎn)的OD值與模型對(duì)照組的同一時(shí)間點(diǎn)相比明顯增高，具有顯著性差異；藻藍(lán)蛋白組和模型對(duì)照組，隨著復(fù)氧后培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，OD值逐漸增加，各組間相鄰時(shí)間點(diǎn)相比，具有明顯差異。(2)缺氧/復(fù)氧后模型對(duì)照組和藻藍(lán)蛋白組的任意時(shí)間點(diǎn)的線(xiàn)粒體膜電位均低于未缺氧組。藻藍(lán)蛋白組各時(shí)間點(diǎn)的線(xiàn)粒體膜電位與模型對(duì)照組的同一時(shí)間點(diǎn)相比明顯增高，具有顯著性差異。藻藍(lán)蛋白組和模型對(duì)照組，隨著復(fù)氧后培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，線(xiàn)粒體膜電位逐漸增加，各組間相鄰