芪葵顆粒對(duì)糖尿病腎病模型抗纖維化和抗炎作用的研究.pdf

1、背景：
　　糖尿病腎病(DN)是糖尿病(DM)患者的主要致死性微血管并發(fā)癥，已成為歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家終末期腎臟病(ESRD)的最主要病因，是我國(guó)導(dǎo)致ESRD的第二大病因。DN早期表現(xiàn)為尿中微量蛋白，繼而出現(xiàn)持續(xù)蛋白尿、水腫、高血壓、腎功能不全，最終發(fā)展至終末期腎病(ESRD)。
　　糖尿病腎病組織學(xué)損傷的主要特征是膠原、纖維連接蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)成分在腎小球系膜和腎小管間質(zhì)進(jìn)行性沉積，最終導(dǎo)致不可逆的腎纖維化。長(zhǎng)期高血糖

2、、脂質(zhì)代謝紊亂、血流動(dòng)力學(xué)異常等多種因素導(dǎo)致腎臟系膜細(xì)胞損傷，釋放單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)、Fkn等多種炎癥因子。這些炎癥因子一方面通過(guò)趨化和激活腎組織內(nèi)單核/巨噬細(xì)胞聚集，參與內(nèi)皮細(xì)胞損傷和細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)沉積;另一方面通過(guò)刺激TGF-β1、CTGF等多種生長(zhǎng)因子的表達(dá)，引起Fn、CoⅣ等多種膠原代謝失衡，ECM積聚，導(dǎo)致腎纖維化。
　　糖尿病腎病的防治主要包括:生活方式改變、控制血糖、控制血壓、調(diào)節(jié)血脂紊亂、限制

3、蛋白攝入以及避免腎毒性藥物使用等綜合措施。然而，上述治療措施并不能完全阻斷或逆轉(zhuǎn)DN的腎臟損害。因此，研發(fā)有效抑制DN腎組織炎癥反應(yīng)，改善腎間質(zhì)纖維化進(jìn)展的藥物具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
　　DN屬于中醫(yī)消渴腎病范疇，其基本病機(jī)為:稟賦不足，脾腎虧虛為本，濕熱內(nèi)蘊(yùn)，瘀血互結(jié)為標(biāo)。中藥組方芪葵顆粒由生黃芪、制首烏和黃蜀葵花組成，具健脾益腎、利濕和絡(luò)功效。我們前期研究發(fā)現(xiàn)，芪葵顆粒能有效改善DN患者臨床癥狀，改善血脂代謝紊亂，降低蛋白尿排泄

4、;芪葵顆粒含藥血清能夠抑制AGEs誘導(dǎo)的人腎小球系膜細(xì)胞增殖、降低Fkn、CTGF表達(dá)，具有抗腎纖維化作用。
　　目的：
　　觀察芪葵顆粒對(duì)DN大鼠的腎臟保護(hù)作用以及對(duì)腎組織纖維化和炎癥反應(yīng)的影響，探討其可能的作用機(jī)制。
　　方法：
　　1.雄性SD大鼠予高糖高脂飼料飼養(yǎng)4周后，采用一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)建立糖尿病SD大鼠模型。選取造模成功的SD大鼠39只，隨機(jī)分為三組:DN模型組、芪葵顆粒組以及

5、厄貝沙坦組，每組各13只。另設(shè)正常對(duì)照組10只。芪葵顆粒組按1.2g/kg/d芪葵顆粒溶液灌胃服藥，厄貝沙坦組按12mg/kg/d厄貝沙坦溶液灌胃服藥，DN對(duì)照組和正常對(duì)照組灌服等體積生理鹽水。定期測(cè)量體重、末梢血糖，治療觀察12周。檢測(cè)血生化、24h尿白蛋白排泄率(UAER)和肌酐清除率(Ccr)等指標(biāo)，研究芪葵顆粒對(duì)DM大鼠的腎保護(hù)作用。
　　2.大鼠腎組織切片HE染色后，采用光鏡觀察各組大鼠腎組織形態(tài)學(xué)改變。
　　3.

6、采用免疫組化法、免疫印跡法檢測(cè)各組大鼠腎組織結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)、纖維連接蛋白(Fn)和Ⅳ型膠原蛋白(CoⅣ)表達(dá)水平。
　　4.采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)各組大鼠腎組織轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β1)、MCP-1和Fkn蛋白和基因表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.芪葵顆粒組大鼠膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平較DN模型組、厄貝沙坦組下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);空腹血糖(FB

7、G)與模型組、厄貝沙坦組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2.芪葵顆粒組大鼠腎臟指數(shù)(RI)、尿白蛋白排泄率(UAER)、肌酐清除率(Ccr)較DN模型組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　3.形態(tài)學(xué)觀察顯示，芪葵顆粒能夠改善DN大鼠腎小球體積增大，基底膜增厚，系膜基質(zhì)增多，腎小管萎縮或管腔擴(kuò)張等病理改變。
　　4.芪葵顆粒組大鼠腎組織CTGF、FN和CoⅣ表達(dá)較DN模型組顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

8、義(P＜0.05)。
　　5.芪葵顆粒能夠降低DN大鼠腎組織TGF-β1、MCP-1和Fkn表達(dá)，與DN模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　中藥芪葵顆粒能夠降低DN大鼠血脂，腎臟指數(shù)、尿白蛋白排泄率和肌酐清除率水平，改善腎組織病變，具有腎臟保護(hù)作用。
　　中藥芪葵顆粒通過(guò)抑制腎組織TGF-β1表達(dá)，影響CTGF分泌和功能，降低Fn和CoⅣ等基質(zhì)蛋白在ECM合成和沉積，進(jìn)而延緩腎間質(zhì)纖維