燈盞花素抗纖維化和抗腫瘤作用研究.pdf

1、黃酮類化合物燈盞花素具有較強(qiáng)的清除自由基、抗氧化、抗菌、抗血栓等多種藥理作用，本課題組發(fā)現(xiàn)其有很好的TGF-β1抑制作用，此作用是否能阻止組織纖維化和抗腫瘤是我們探索的重點(diǎn)。本研究的目的是探討燈盞花素的抗纖維化和抗腫瘤作用及其可能的作用機(jī)制。
　　 本文采用MTT法檢測(cè)燈盞花素體外對(duì)大鼠肝星形細(xì)胞HSC、T淋巴細(xì)胞和K562增殖的影響；采用小鼠CCl4肝損傷(纖維化)模型和小鼠BLM肺纖維化模型，評(píng)價(jià)燈盞花素給藥后對(duì)肝纖維化及肺

2、纖維化的保護(hù)作用，并檢測(cè)組織抗氧化酶活性(如過(guò)氧化物酶、過(guò)氧化氫酶和超氧化物歧化酶)、TGF-β1、TNF-α和MDA含量；采用Lewis肺癌皮下移植腫瘤模型和肺轉(zhuǎn)移瘤模型評(píng)價(jià)燈盞花素體內(nèi)單獨(dú)及聯(lián)合放療或化療對(duì)腫瘤的抑制作用，并且對(duì)聯(lián)合放療和化療的增效減毒作用進(jìn)行評(píng)價(jià)；采用4T1乳腺癌皮下移植腫瘤模型，評(píng)價(jià)燈盞花素對(duì)腫瘤手術(shù)切除后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的預(yù)防作用。
　　 體外細(xì)胞培養(yǎng)顯示：燈盞花素1-50μmol/L對(duì)體外培養(yǎng)的小鼠脾臟淋巴

3、細(xì)胞增殖有明顯促進(jìn)作用，其最佳濃度為5-10μmol/L，對(duì)體外培養(yǎng)的HSC細(xì)胞形態(tài)無(wú)顯著改變，對(duì)乳酸脫氫酶釋放及細(xì)胞增殖也均無(wú)顯著影響，但對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的HSC細(xì)胞增殖有抑制作用，IC50為22.04μmol/L(95％可信限13.94-34.19μmol/L)。燈盞花素100μg/ml對(duì)K562細(xì)胞生長(zhǎng)有一定抑制作用，在10-100μg/ml濃度范圍內(nèi)燈盞花素對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞生長(zhǎng)無(wú)明顯影響，但能增強(qiáng)小鼠淋巴細(xì)胞對(duì)阿霉素的抵抗，促進(jìn)

4、阿霉素引起的K562細(xì)胞生長(zhǎng)抑制。在ELISA凋亡檢測(cè)和流式細(xì)胞凋亡檢測(cè)中，燈盞花素10或30μg/ml能明顯促進(jìn)阿霉素引起的K562細(xì)胞凋亡。
　　 在大鼠CCl4肝纖維化模型中，大鼠血清ALT和AST分別為571.35U/L和514.52U/L(正常對(duì)照為56.73和139.27U/L)，分別是正常大鼠的10倍和3.69倍；燈盞花素ig100mg/kg治療的大鼠血清ALT及AST為218.22U/L和247.81U/L，與未

5、治療組比較分別降低38.19％和48.16％。燈盞花素(ig100mg/kg)治療對(duì)大鼠肝臟羥哺氨酸、膠原、MDA及TGF-β1的升高均有明顯降低作用，并且對(duì)POD、CAT和總SOD、Cu-ZnSOD酶活性的降低均有明顯的升高作用；同樣，在小鼠BLM肺纖維化模型中，燈盞花素(ig100mg/kg)對(duì)BLM誘導(dǎo)的小鼠肺臟POD、CAT、總SOD、Cu-ZnSOD酶活性的降低均有明顯的升高作用，對(duì)血清中羥哺氨酸、膠原、MDA和肺組織中TGF

6、-β水平的升高也有明顯的降低作用。
　　 在Lewis肺癌皮下移植瘤和肺轉(zhuǎn)移腫瘤模型中燈盞花素單獨(dú)使用具有良好的抗腫瘤和腫瘤轉(zhuǎn)移抑制作用；與放療或化療聯(lián)合使用不但能夠產(chǎn)生協(xié)同抗腫瘤作用，而且能夠抑制甚至消除放療或化療所產(chǎn)生的造血系統(tǒng)的損害；既可以延長(zhǎng)荷瘤小鼠的存活時(shí)間，又不影響荷瘤小鼠的狀態(tài)和體重。在4T1乳腺癌皮下移植瘤模型中，手術(shù)切除后對(duì)照組腫瘤復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率為50％和70％，燈盞花素(ig200mg/kg)治療的小鼠手術(shù)切

7、除后腫瘤復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率分別為20％和20％。
　　 機(jī)制研究表明：燈盞花素體外對(duì)ConA誘導(dǎo)的小鼠脾臟細(xì)胞增殖有增強(qiáng)作用，能抑制TGF-β1和IL-4，促進(jìn)IFN-γ和IL-2分泌；燈盞花素能促進(jìn)阿霉素引起的K562細(xì)胞生長(zhǎng)抑制、細(xì)胞色素C釋放、caspase-8和caspase-3激活，上調(diào)其p53/bcl-2表達(dá)比率，增加細(xì)胞凋亡。
　　 綜上所述，燈盞花素有確切的抗組織纖維化和抗腫瘤作用，與放疔和化療有良好的協(xié)同作