糖尿病狀態(tài)下阿司匹林抵抗的機(jī)制及川芎嗪干預(yù)研究.pdf

1、作為臨床抗血小板治療的“金標(biāo)準(zhǔn)”，阿司匹林廣泛應(yīng)用于心腦血管疾病的二級(jí)預(yù)防和心血管風(fēng)險(xiǎn)水平較高者的一級(jí)預(yù)防。但自90年代以來臨床醫(yī)生發(fā)現(xiàn)并報(bào)道了阿司匹林抵抗現(xiàn)象，目前機(jī)制、治療均未有重大突破，對(duì)阿司匹林的臨床應(yīng)用產(chǎn)生了一定的限制。糖尿病是阿司匹林抵抗的危險(xiǎn)因素，糖尿病患者阿司匹林抵抗的心血管風(fēng)險(xiǎn)更高，糖尿病狀態(tài)下的阿司匹林抵抗研究迫在眉睫。傳統(tǒng)活血化瘀藥治療阿司匹林抵抗療效確切，中藥活性成分已成為阿司匹林抵抗治療候選藥物的來源。

2、　　研究工作包括理論研究和實(shí)驗(yàn)研究?jī)刹糠帧?br>　　一、理論及臨床研究回顧分析
　?。ㄒ唬┫到y(tǒng)概述了阿司匹林抵抗的西醫(yī)研究進(jìn)展。
　　（二）重點(diǎn)回顧了糖尿病狀態(tài)下阿司匹林抵抗的機(jī)制與治療。
　?。ㄈ┗仡櫚⑺酒チ值挚沟闹嗅t(yī)研究進(jìn)展并通過臨床隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)對(duì)中醫(yī)藥治療阿司匹林抵抗療效及安全性開展薈萃分析，明確阿司匹林抵抗研究進(jìn)展，為實(shí)驗(yàn)研究設(shè)計(jì)提供前提條件。
　　二、實(shí)驗(yàn)研究
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3、.建立實(shí)驗(yàn)性糖尿病狀態(tài)下阿司匹林抵抗大鼠模型并評(píng)價(jià)。
　　2.探討糖尿病狀態(tài)下阿司匹林抵抗產(chǎn)生的機(jī)制。
　　3.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)觀察川芎嗪?jiǎn)误w協(xié)同阿司匹林預(yù)給藥對(duì)糖尿病狀態(tài)下中年大鼠的干預(yù)作用，研究其作用機(jī)制。
　　4.體外實(shí)驗(yàn)探討川芎嗪對(duì)高糖誘導(dǎo)的原代HUVEC細(xì)胞損傷、對(duì)水楊酸聯(lián)合高糖誘導(dǎo)的原代HUVEC細(xì)胞損傷的作用與機(jī)制。
　　（二）主要實(shí)驗(yàn)方法
　　便攜式血糖儀大鼠尾靜脈采血檢測(cè)空腹血糖;酶法檢測(cè)大鼠血清

4、TC、TG、FFA的水平; CHRONOLOG血小板聚集分析儀比濁法檢測(cè)ADP、AA誘導(dǎo)的血小板聚集率;動(dòng)靜脈環(huán)路血栓形成法檢測(cè)大鼠藥物抗栓效果;放免法檢測(cè)大鼠血漿TXB2、6-keto-PGF1α水平;LC/MS法檢測(cè)大鼠血漿水楊酸谷濃度;PCR法檢測(cè)大鼠肝臟代謝酶UGT1A1、1A6、1A7、2B1及主動(dòng)脈COX-2、IL-1β、NLPRP3的mRNA表達(dá);Western blot法檢測(cè)主動(dòng)脈及HUVEC細(xì)胞COX-2、IL-1β、

5、NLPRP3的蛋白水平，細(xì)胞TLR4/MyD88/NF-κB通路蛋白水平;免疫組化法檢測(cè)主動(dòng)脈COX-2表達(dá)。Elisa法檢測(cè)細(xì)胞上清液TNF-α、IL-1β、TXB2、6-keto-PGF1α等水平。
　?。ㄈ┲饕Y(jié)論
　　1.實(shí)驗(yàn)性2型糖尿病中年大鼠長(zhǎng)期大劑量予以阿司匹林后能夠形成阿司匹林抵抗模型。
　　2.糖尿病狀態(tài)下阿司匹林抵抗發(fā)生的機(jī)制與阿司匹林代謝產(chǎn)物水楊酸的血藥濃度密切相關(guān)，水楊酸血藥濃度過高能夠顯著抑

6、制大鼠主動(dòng)脈COX-2表達(dá)，打破機(jī)體COX功能平衡，影響TXB2、6-keto-PGF1α水平，通過COX-2/PGI2途徑降低阿司匹林抗血小板療效。
　　3.糖尿病狀態(tài)下的水楊酸蓄積是機(jī)體代謝酶UGT1A1、1A6、1A7、2B1等共同作用的結(jié)果，以中老年雌性大鼠更為顯著。
　　4.川芎嗪能夠通過改變糖尿病大鼠肝臟代謝酶mRNA水平顯著改善病理情況下的水楊酸代謝，并通過COX-2/PGI2途徑提高病理情況下阿司匹林的抗血小

7、板療效。
　　5.川芎嗪體外通過COX-2/IL-1β/NLRP3以及TLR4/MyD88/NF-κB雙通路抑制高糖損傷下原代HUVEC細(xì)胞的炎癥因子、炎性蛋白表達(dá)，影響細(xì)胞TXB2、6-keto-PGF1α的釋放水平。
　　6.川芎嗪通過抑制COX-1蛋白表達(dá)、相對(duì)升高COX-2蛋白表達(dá)，恢復(fù)COX功能平衡，降低水楊酸聯(lián)合高糖誘導(dǎo)的原代HUVEC損傷所釋放的TXB2，提高TXB2/6-keto-PGF1α水平。通過TLR4