Nek2A-SuFu負(fù)反饋調(diào)節(jié)Gli介導(dǎo)的Hedgehog信號(hào)通路.pdf

1、背景：
　　Hedgehog（Hh）信號(hào)通路是在研究果蠅基因突變遺傳分析時(shí)發(fā)現(xiàn)的，對(duì)機(jī)體多種器官發(fā)育起著重要的作用。近年來(lái)越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)Hh信號(hào)通路與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展亦密切有關(guān)，比如基底細(xì)胞癌、非小細(xì)胞肺癌、膀胱癌和胰腺癌等。在級(jí)聯(lián)Hh信號(hào)通路中，轉(zhuǎn)錄因子Gli是其級(jí)聯(lián)傳導(dǎo)的末點(diǎn)，因此，又有人稱之為Hh/Gli信號(hào)通路。Suppressor of Fused(SuFu)是Hedgehog(Hh)信號(hào)通路最保守的關(guān)鍵組分之一，

2、在Hh信號(hào)通路中發(fā)揮重要作用。有研究報(bào)道SuFu可以抑制Hh信號(hào)通路的活性，但其調(diào)節(jié)Hh信號(hào)通路的機(jī)制還不是很清楚。
　　Nek2A是絲氨酸/蘇氨酸激酶Nek家族蛋白中的一員，主要調(diào)節(jié)細(xì)胞中的中心體。Nek家族蛋白主要有3種剪切形式，分別是Nek2A、Nek2B和Nek2C，在脊椎動(dòng)物中主要以Nek2A和Nek2B兩種剪切形式存在。由于Nek2在細(xì)胞有絲分裂以及癌癥相關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中重要的調(diào)節(jié)作用，其已成為一個(gè)重要的致癌基因。在

3、Nek2高表達(dá)的腫瘤中，患者表現(xiàn)出不良預(yù)后。
　　我們前期的研究發(fā)現(xiàn)NIMA相關(guān)表達(dá)激酶2A(Nek2A)與Hh信號(hào)通路抑制因子SuFu相互作用，鑒于Nek2A和SuFu在腫瘤中發(fā)揮的重要作用及他們之間的相互作用，研究Hh/SuFu/Nek2A之間的相互作用將會(huì)為解決人類疾病提供一個(gè)新的思路。
　　目的：
　　1、研究Nek2A對(duì)SuFu的調(diào)控機(jī)制；
　　2、分析Nek2A與Hh信號(hào)通路之間的相互作用；
　

4、　3、闡明Gli1/2調(diào)控NEK2A的分子機(jī)制。
　　方法：
　　1、Western blot檢測(cè)Nek2A對(duì)SuFu及Hh信號(hào)通路各組份蛋白表達(dá)的影響；
　　2、免疫共沉淀檢測(cè)Nek2A對(duì)SuFu蛋白穩(wěn)定性的影響；
　　3、Real-time PCR檢測(cè)Nek2A對(duì)Hh信號(hào)通路各組分mRNA的影響；
　　4、雙熒光素報(bào)告基因和染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Gli1/2調(diào)控NEK2A轉(zhuǎn)錄的分子機(jī)制。
　　結(jié)

5、果：
　　1、Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Nek2A抑制SuFu泛素化降解；
　　2、Western blot和Real-time PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明干擾Nek2A激活Hh信號(hào)通路；
　　3、Western blot和Real-time PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Hh信號(hào)通路調(diào)節(jié)Nek2A；
　　4、雙熒光素報(bào)告基因和染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明NEK2A是Gli1/2的靶基因。
　　結(jié)論：
　　Gl