GRIP1調(diào)節(jié)Hedgehog-Gli1信號通路的研究.pdf

1、Hedgehog(HH)信號通路是一條相對比較保守的信號通路，在生物的形態(tài)發(fā)生及胚胎形成中起重要作用。在哺乳動物細胞內(nèi)，Glis家族共有三個成員，Glil是HH信號通路中最主要的轉(zhuǎn)錄因子。
　　糖皮質(zhì)激素受體相互作用蛋白1(Glucocorticoid receptor-interacting protein1，GRIP1)，是類固醇受體輔激活因子(SRC)家族成員之一，可以輔助多種轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合啟動子進而激活基因轉(zhuǎn)錄。
　　

2、本文的研究重點是通過熒光素酶報告基因試驗確定GRIP1能夠增強Gli1的轉(zhuǎn)錄活性，并進一步研究GRIP1能夠增強Gli1的轉(zhuǎn)錄活性的具體機制。主要內(nèi)容包括:
　　(1)首先在不同細胞系中，通過熒光素酶報告基因試驗確定SRC家族(SRC-1、GRIP1和AIB1)中，只有GRIP1能特異性地增強Gli1的轉(zhuǎn)錄活性。同時證明GRIP1氨基酸序列的1011-1464片段是增強Gli1的轉(zhuǎn)錄活性所必需的。
　　(2)隨后研究GRIP

3、1與Glil蛋白之間的關(guān)系，通過哺乳動物細胞雙雜交實驗研究發(fā)現(xiàn)GRIP1與Glil之間存在相互作用，之后通過細胞免疫熒光試驗發(fā)現(xiàn)GRIP1和Gli1在細胞核內(nèi)共定位。
　　(3)最后研究GRIP1與Gli1相互作用的區(qū)域，通過哺乳動物細胞雙雜交試驗發(fā)現(xiàn)Gli1的407-1020區(qū)域是GRIP1與Gli1相互作用必需的片段，同時研究GRIP1的1011-1464區(qū)域是GRIP1與Gli1(407-1020)相互作用必需的，通過免疫共