決明子對大鼠肝臟CYP450酶及相關(guān)代謝組學(xué)的研究.pdf

1、目的：綜合采用UPLC-QTOF-MS和代謝組學(xué)相關(guān)方法，探尋決明子水提物（AESC）對大鼠肝臟CYP450酶的影響，分析內(nèi)源性代謝產(chǎn)物的差異性變化及效應(yīng)單體橙黃決明素體內(nèi)代謝過程的特點(diǎn)，為決明子的臨床合理用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：（1）雄性SD大鼠灌胃AESC，取肝微粒體在特定的條件下與特異性探針?biāo)幬锇l(fā)生反應(yīng)，應(yīng)用超高效液相色譜/三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）分析測定特異性的代謝產(chǎn)物生成量，并應(yīng)用Q-PCR和We

2、stern blot對mRNA和蛋白表達(dá)水平進(jìn)行檢測。（2）雄性SD大鼠灌胃AESC，收集各組大鼠24h的尿液，采集全血，取肝臟。測定血生化，應(yīng)用UPLC-QTOF-MS檢測大鼠尿液代謝指紋圖譜，采用主成分分析（PCA）方法和正交偏最小二乘判別分析方法（OPLS-DA）分析，通過變量重要性投影（VIP）和T檢驗(yàn)篩選潛在生物標(biāo)志物并測定其相對含量。（3）雄性SD大鼠，給予橙黃決明素，分別于給藥前、后收集血液、膽汁、尿液和糞便，所有樣品經(jīng)處

3、理后，UPLC-QTOF-MS進(jìn)樣分析，利用Metabolynx4.0軟件和質(zhì)量虧損（MDF）技術(shù)等方法尋找代謝產(chǎn)物，通過比對橙黃決明素和代謝產(chǎn)物的準(zhǔn)確分子量、二級質(zhì)譜碎片，進(jìn)而確定未知代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)果：（1）AESC組可明顯誘導(dǎo)CYP1A2、2B1、2C11、2E1和3A1的酶活性，其中AESC（1.5 g·kg-1）組明顯抑制CYP2D2的酶活性；AESC組對CYP1A2、2C11、2D2和2E1 mRNA的表達(dá)水平

4、具有顯著誘導(dǎo)作用，對CYP2B1、3A1 mRNA的表達(dá)沒有明顯作用；AESC組對CYP2C11、2E1的蛋白表達(dá)也具有誘導(dǎo)作用，但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。（2）血生化中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）AESC（5 g·kg-1）組有升高趨勢，且具有顯著性差異，谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、超氧化物歧化酶（SOD）、白蛋白（ALB）和谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GST）AESC組與空白對照組比較，無顯著性差異。病理組織結(jié)果中，AESC組與正常對照組肝臟組織比較無明顯異常。

5、AESC5和15g·kg-1中脯氨酸甜菜堿（Proline betaine）、尿酸（Uric acid）、甘氨酸（Glycine）和?；撬幔═aurine）的相對含量明顯低于空白對照組；AESC1.5和15g·kg-1中二甲基鳥苷（1,7-Dimethylguanosine）的相對含量明顯低于空白對照組，AESC5g·kg-1與空白對照組沒有顯著性差異；AESC15g·kg-1中檸檬酸（Citric acid）的相對含量明顯低于空白對照

6、組，AESC1.5g·kg-1中檸檬酸（Citric acid）的相對含量明顯高于空白對照組，AESC5g·kg-1與空白對照組沒有顯著性差異。（3）鑒定出6種橙黃決明素的體內(nèi)代謝產(chǎn)物（M1-6)，它們主要是橙黃決明素的去甲基化、羥基化、甲基化、O-葡萄糖醛酸化結(jié)合以及O-硫酸化結(jié)合產(chǎn)物。
　　結(jié)論：（1）AESC對CYP450同工酶的活性產(chǎn)生不同程度的誘導(dǎo)或抑制作用，尤其是誘導(dǎo)了CYP2C11、2E1亞型酶的活性，同時(shí)也上調(diào)其m