水飛薊素和富硒蛹蟲(chóng)草對(duì)雷公藤甲素致大鼠肝損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的:
　　本研究旨在評(píng)價(jià)水飛薊素和富硒蛹蟲(chóng)草對(duì)雷公藤甲素致大鼠急性肝損傷的防治效果以及闡明兩者的作用機(jī)制。
　　方法:
　　1.水飛薊素對(duì)雷公藤甲素致大鼠肝損傷的保護(hù)作用研究:使用雄性Wistar大鼠60只，隨機(jī)分為5組，即正常組，雷公藤甲素造模組，水飛薊素高、中、低劑量給藥組(200、100、50 mg/kg)，正常組與模型組灌胃給予生理鹽水七天，第八天分別腹腔注射生理鹽水和雷公藤甲素(2mg/kg)。水飛薊素給藥

2、組分別灌胃給予高、中、低劑量的水飛薊素七天，第八天腹腔注射雷公藤甲素造模。造模結(jié)束24小時(shí)后對(duì)所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腹腔注射10％水合氯醛溶液使其麻醉，用普通采血管收集腹腔大動(dòng)脈血，用于檢測(cè)血清轉(zhuǎn)氨酶和總膽固醇含量。放血至死后立即采集肝臟組織，一部分經(jīng)甲醛固定后制作成HE染色病理切片、免疫組化切片以及TUNEL染色切片，一部分制成勻漿液用于檢測(cè)抗氧化酶活力、脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物、炎癥因子以及細(xì)胞色素C含量，一部分提取蛋白后檢測(cè)磷酸化JNK、磷酸化p38

3、、活化的caspase-3以及Nrf2蛋白表達(dá)水平。
　　2.富硒蛹蟲(chóng)草對(duì)雷公藤甲素致大鼠肝損傷的保護(hù)作用研究:使用雄性Wistar大鼠84只，隨機(jī)分為7組，即正常組，雷公藤甲素造模組，富硒蛹蟲(chóng)草對(duì)照組(1.5g/kg)，水飛薊素陽(yáng)性對(duì)照給藥組(200 mg/kg)，富硒蛹蟲(chóng)草低劑量給藥組(0.75g/kg)，富硒蛹蟲(chóng)草高劑量給藥組（1.5g/kg），普通蛹蟲(chóng)草給藥組(1.5g/kg)。正常組與模型組灌胃給予生理鹽水七天，第八天分

4、別腹腔注射生理鹽水和雷公藤甲素（2mg/kg）。富硒蛹蟲(chóng)草對(duì)照組灌胃給予1.5g/kg富硒蛹蟲(chóng)草七天，第八天腹腔注射生理鹽水。水飛薊素給藥組、高劑量和低劑量富硒蛹蟲(chóng)草給藥組以及普通蛹蟲(chóng)草給藥組分別灌胃給予200mg/kg水飛薊素、1.5g/kg和0.75g/kg富硒蛹蟲(chóng)草以及1.5g/kg普通蛹蟲(chóng)草七天，第八天腹腔注射雷公藤甲素造模。造模結(jié)束24小時(shí)后對(duì)所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腹腔注射10％水合氯醛溶液使其麻醉，用普通采血管收集腹腔大動(dòng)脈血，用于檢

5、測(cè)血清轉(zhuǎn)氨酶和總膽固醇含量。放血至死后立即采集肝臟組織，一部分經(jīng)甲醛固定后制作成HE染色病理切片、免疫組化切片以及TUNEL染色切片，一部分制成勻漿液用于檢測(cè)抗氧化酶活力、脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物以及細(xì)胞色素C含量，一部分提取蛋白后檢測(cè)活化的caspase-3以及Nrf2蛋白表達(dá)水平，一部分提取RNA后檢測(cè)NQO1、HO-1和GCLC mRNA表達(dá)水平。最后采用石墨爐原子吸收光譜法檢測(cè)富硒蛹蟲(chóng)草和普通蛹蟲(chóng)草中硒含量、高效液相聯(lián)用質(zhì)譜檢測(cè)蟲(chóng)草素和硒

6、代氨基酸的含量。
　　結(jié)果:
　　1.水飛薊素能夠顯著下調(diào)由雷公藤甲素造成的血清轉(zhuǎn)氨酶(AST、ALT、ALP、GGT)和總膽固醇含量增高，并且能夠顯著改善雷公藤甲素造成的肝臟組織結(jié)構(gòu)變形、細(xì)胞壞死和炎性浸潤(rùn)的現(xiàn)象。另外，水飛薊素能夠顯著恢復(fù)雷公藤甲素造成的抗氧化酶(SOD、CAT、GSH、GST、GSH-Px)活力下降和抑制MDA以及炎癥因子(IL-6，IL-10、IL-1β、TNF-α)以及細(xì)胞色素C含量增高。水飛薊素能

7、夠有效抑制磷酸化p38和磷酸化JNK蛋白、凋亡蛋白活化的caspase-3以及Bax的過(guò)表達(dá)，但不能提高Nrf2蛋白的表達(dá)。
　　2.富硒蛹蟲(chóng)草能夠顯著下調(diào)由雷公藤甲素造成的血清轉(zhuǎn)氨酶(AST、ALT、ALP、GGT)和總膽固醇含量增高，明顯改善肝組織病理學(xué)畸變，增加細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶(SOD、CAT、GSH、GST、GSH-Px)活力，減少M(fèi)DA的堆積，并且能夠上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)水平，抑制細(xì)胞色素C的釋放、凋亡蛋白Bax

8、以及活化的caspase-3蛋白的過(guò)表達(dá)從而降低細(xì)胞凋亡指數(shù)。另外富硒蛹蟲(chóng)草能夠激活Nrf2蛋白來(lái)調(diào)控GCLC、HO-1和NQO1 mRNA的表達(dá)。
　　3.富硒蛹蟲(chóng)草中的硒、蟲(chóng)草素和硒代胱氨酸的含量均顯著高于普通蛹蟲(chóng)草組。
　　結(jié)論:
　　水飛薊素和富硒蛹蟲(chóng)草都能夠顯著增強(qiáng)體內(nèi)抗氧化防御體系，控制氧化應(yīng)激壓力，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)來(lái)預(yù)防雷公藤甲素造成的肝細(xì)胞凋亡和肝功能失調(diào)，兩者的作用效果與劑量呈明顯的正相關(guān)性，其中高