雷公藤內(nèi)酯醇對大鼠急性脊髓損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、　　目的：探討雷公藤內(nèi)酯醇(Triptolide,Tri)對大鼠急性脊髓損傷的保護(hù)作用,為應(yīng)用Tri治療急性脊髓損傷提供一定的理論基礎(chǔ)及實驗依據(jù),為臨床治療急性脊髓損傷提供一種新的思路及方法。
　　方法：60只SPF級SD大鼠隨機(jī)分為4組,分別為Tri組(18只)、陽性對照組甲基強(qiáng)的松龍(Methylprednisolone,MP)組(18只)、單純損傷組(18只)、空白對照組(6只)?？瞻讓φ战M大鼠不做任何處理,其它三組大鼠通

2、過摸肋骨方法定位大鼠T11胸椎,暴露大鼠脊髓后以Nystrom法壓迫脊髓造模。造模成功后,按實驗設(shè)計分別給藥：空白對照組不做任何處理；Tri組大鼠術(shù)后立即行Tri腹腔注射,注射量為0.4mg/kg,以后每日注射1次,最長持續(xù)7天；MP組大鼠術(shù)后立即行大劑量MP腹腔注射,注射量為30mg/kg,8小時重復(fù)一次,以后每日注射1次,最長持續(xù)3天；單純損傷組術(shù)后立即行生理鹽水腹腔注射,注射量為3ml/kg,以后每日注射1次,最長持續(xù)7天。術(shù)后第

3、3天,取各組大鼠各3只,行SCI大鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能檢測。Tri組、MP組及單純損傷組三組大鼠在術(shù)后1、3、5、7、14天各時間點取各組大鼠3只,先做BBB評分及斜板實驗,然后處死大鼠取傷處脊髓組織做HE染色及生長相關(guān)蛋白43(Growth Associated Protein-43,GAP-43)免疫組化檢測,同時酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)法檢測大鼠血清中抑炎

4、因子白細(xì)胞介素10 (Interleukin-1,IL-10)及炎癥因子腫瘤壞死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)的含量變化?？瞻讓φ战M大鼠術(shù)后1、3、5、7天各時間點只做BBB評分及斜板實驗不處死,術(shù)后第14天行BBB評分及斜板實驗后處死取材、取血行相關(guān)檢查。
　　結(jié)果：(1)BBB評分及斜板試驗結(jié)果：術(shù)后1、3、5、7天各時間點各手術(shù)組BBB評分及斜板試驗結(jié)果較空白對照組低(P<0.05)

5、；各手術(shù)組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；術(shù)后14天,各手術(shù)組BBB評分及斜板試驗較空白對照組低(P<0.05)；各手術(shù)組間比較,Tri組大鼠BBB評分及斜板試驗結(jié)果較MP組及單純損傷組高(P<0.05)；MP組與單純損傷組結(jié)果無顯著差別(P>0.05)。(2)GAP-43免疫組化顯示：術(shù)后1天各手術(shù)組GAP-43免疫組化IOD值較空白對照組高(P<0.05)；各手術(shù)組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；術(shù)后3、5、7、14天各時間

6、點各手術(shù)組GAP-43免疫組化IOD值較空白對照組高(P<0.05)；各手術(shù)組間比較,Tri組大鼠GAP-43免疫組化IOD值較MP組及單純損傷組高(P<0.05)；MP組與單純損傷組結(jié)果無顯著差別(P>0.05)；(3) HE染色顯示：空白對照組脊髓未見明顯組織學(xué)變化。術(shù)后1天損傷部位有出血淤血,神經(jīng)元出現(xiàn)腫脹,少數(shù)神經(jīng)元的染色質(zhì)變稀疏；術(shù)后3、5天相應(yīng)部位損傷加重,部分神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)形態(tài)改變,壞死區(qū)域有膠質(zhì)細(xì)胞增生；術(shù)后7天大鼠脊髓細(xì)

7、胞水腫達(dá)到高峰,腫脹非常明顯,部分神經(jīng)元出現(xiàn)核固縮,胞體皺縮,細(xì)胞外間隙增多,部分出現(xiàn)核的解離；術(shù)后14天損傷部位有膠質(zhì)瘢痕形成,膠質(zhì)細(xì)胞大量增生,大鼠的神經(jīng)元數(shù)量減少,但是存活的神經(jīng)元包膜逐漸清晰,腫脹好轉(zhuǎn)。HE染色顯示傷后1、3、5、7天各時間點,三組大鼠之間病理表現(xiàn)無明顯差異；術(shù)后14天,Tri組損傷腫脹及出現(xiàn)核固縮或解離的神經(jīng)元數(shù)量少于MP組及單純損傷組,MP組與單純損傷組之間無顯著差異；術(shù)后14天Tri組膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量少于MP組

8、及單純損傷組,MP組與單純損傷組之間無顯著差異；術(shù)后14天Tri組大鼠脊髓組織結(jié)構(gòu)較MP組與單純損傷組清晰；(4)血清IL-10檢測：術(shù)后1d,各手術(shù)組血清IL-10較空白對照組高(P<0.05)；各手術(shù)組間比較,MP組大鼠血清IL-10較Tri組及單純損傷組高(P<0.05)；Tri組與單純損傷組結(jié)果無顯著差別(P>0.05)；術(shù)后3、5、7、14天,各手術(shù)組血清IL-10較空白對照組高(P<0.05)；各手術(shù)組間比較,Tri組及MP

9、組血清IL-10較單純損傷組高(P<0.05)；Tri組與MP組結(jié)果無顯著差別(P>0.05)；(5)血清TNF-α檢測：術(shù)后1d,各手術(shù)組血清TNF-α較空白對照組高(P<0.05)；各手術(shù)組間比較,MP組大鼠血清TNF-α較Tri組及單純損傷組低(P<0.05)；Tri組與單純損傷組結(jié)果無顯著差別(P>0.05)；術(shù)后3、5、7、14天,各手術(shù)組血清TNF-α較空白對照組高(P<0.05)；各手術(shù)組間比較,Tri組及MP組血清TNF

10、-α較單純損傷組低(P<0.05)；Tri組與MP組結(jié)果無顯著差別(P>0.05)；(6)腹腔巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)檢測：術(shù)后第3天,各組大鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)由高到低依次為：Tri組、單純損傷組、空白對照組、MP組,結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：雷公藤內(nèi)酯醇對大鼠急性脊髓損傷具有一定的保護(hù)作用,其保護(hù)作用可能是通過調(diào)控增加脊髓損傷后大鼠機(jī)體 IL-10 的表達(dá)及降低 TNF-α的表達(dá)、增強(qiáng)脊髓損傷后大鼠體內(nèi)巨噬細(xì)胞