雷公藤內(nèi)酯醇對腎臟系膜細胞NF-κB通路作用及其機制研究.pdf

1、目的：以體外培養(yǎng)的正常大鼠系膜細胞為對象，以TNF-α為刺激因子，觀察不同濃度雷公藤內(nèi)酯醇對腫瘤壞死因子(TNF-α)介導(dǎo)的腎小球系膜細胞(GMC)核因子-κB(NF-κB)活化、抑制蛋白IκB及單核細胞趨化因子-1(MCP-1)、細胞間粘附分子-1（ICAM-1）表達的影響，研究TNF-α- NF-κB/I-κB–MCP-1的通路蛋白表達水平。探討雷公藤內(nèi)酯醇在抑制腎小球系膜細胞炎癥因子表達及抗炎作用可能的機制。
　　方法：培養(yǎng)

2、大鼠GMC株，用10ul/L TNF-α刺激GMC，將培養(yǎng)的大鼠GMC隨機分為6組：正常培養(yǎng)對照組、TNF-α刺激組、TNF-α加NF-κB抑制劑吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽(PDTC)、TNF-α和3種不同濃度的雷公藤內(nèi)酯醇共孵育組。分別采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)及新型凝膠蛋白遷移率法(EMSA)結(jié)合ELISA法，檢測GMC核內(nèi)NF-κBp65活化率，細胞培養(yǎng)上清液中MCP-1水平，GMC質(zhì)內(nèi)IκB表達水平及三者可能存在的通路。

3、>　　結(jié)果:
　　⑴：TNF-α能明顯上調(diào)了MCP-1及ICAM-1的表達，且明顯增高細胞核內(nèi)NF-κB、顯著降低細胞質(zhì)內(nèi)I-κB的蛋白含量，P<0.01。
　?、疲豪坠賰?nèi)酯醇顯著抑制了GMC分泌MCP-1、ICAM-1水平，P<0.01；雷公藤內(nèi)酯醇、NF-κB抑制劑PDTC均能明顯下調(diào)細胞核內(nèi)NF-κB、MCP-1、ICAM-1蛋白的表達P<0.01，且對I-κB亦有抑制其磷酸化的作用P<0.05。
　　結(jié)論：實

4、驗表明TNF-α可激活I(lǐng)κBα，使其發(fā)生磷酸化，通過激活NF-κB誘導(dǎo)MCP-1、ICAM-1分泌，促進腎臟炎癥進展。雷公藤內(nèi)酯醇可下調(diào)TNF-α介導(dǎo)的大鼠GMC內(nèi)NF-κBp65、MCP-1、ICAM-1水平，抑制TNF-α誘導(dǎo)的大鼠GMC內(nèi)IκB蛋白磷酸化水解。
　　提示：雷公藤內(nèi)酯醇通過抑制TNF-α誘導(dǎo)的大鼠GMCIκB的磷酸化，降解影響NF-κB活化；抑制TNF-α誘導(dǎo)的大鼠GMC的MCP-1、ICAM-1分泌，可能通過