雷公藤內(nèi)酯醇對(duì)AD細(xì)胞模型海馬神經(jīng)元突觸素表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　 通過(guò)觀察雷公藤內(nèi)酯醇(triptolide,TP)對(duì)阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)細(xì)胞模型海馬神經(jīng)元突觸素表達(dá)的影響,以探討雷公藤內(nèi)酯醇對(duì)AD的作用機(jī)制,為臨床上尋找防治AD的有效中藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:
　　 選擇合適濃度的AD1-40作用于小膠質(zhì)細(xì)胞建立AD損傷的細(xì)胞模型,加入不同劑量的雷公藤內(nèi)酯醇制備成四組小膠質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)液(microglialcond

2、itioned medium,MCM)。不同組MCM干預(yù)的海馬神經(jīng)元分為正常對(duì)照組、正常MCM組、模型MCM組、低劑量用藥MCM組、高劑量用藥MCM組等五組,進(jìn)行下列實(shí)驗(yàn):
　　 1.免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)各組海馬神經(jīng)元在不同時(shí)程(2h、24h)突觸素免疫反應(yīng)陽(yáng)性產(chǎn)物表達(dá)的變化。
　　 2.Western blot檢測(cè)各組海馬神經(jīng)元在不同時(shí)程(2h、24h)突觸素蛋白表達(dá)的變化。
　　 3.RT-PCR檢測(cè)各組海馬

3、神經(jīng)元在不同時(shí)程(2h、24h)突觸素mRNA表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1、免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示:
　　 (1)加入MCM的海馬神經(jīng)元培養(yǎng)2h后,模型MCM組突觸素累積光密度(integrated optical density,IOD)略低于正常對(duì)照組,其他各組突觸素的表達(dá)沒(méi)有明顯的差異。
　　 (2)加入MCM的海馬神經(jīng)元培養(yǎng)24h后,模型MCM組突觸素IOD值相對(duì)于正常對(duì)照組顯著降低；低

4、劑量用藥MCM組突觸素IOD值與模型MCM組比較顯著增高,但仍低于正常對(duì)照組；高劑量用藥MCM組IOD值雖與正常對(duì)照組相比較仍有降低,但與模型MCM組比較顯著增高,與低劑量用藥MCM組相比較也有明顯的增高。
　　 2、Western blot結(jié)果顯示:各組海馬神經(jīng)元培養(yǎng)2h后,突觸素的表達(dá)量除模型MCM組有下降,其他各組無(wú)明顯差別。各組海馬神經(jīng)元培養(yǎng)24h后,模型MCM組明顯下降；低劑量用藥MCM組突觸素的表達(dá)量雖低于正常對(duì)照組

5、但與模型MCM組比較顯著增高；高劑量用藥MCM組突觸素生長(zhǎng)素雖與正常對(duì)照組相比較仍有降低,但與模型MCM組比較顯著增高,與低劑量用藥MCM組相比較也有明顯的增高。
　　 3、RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示:加藥后2小時(shí)各組海馬神經(jīng)元之間突觸素mRNA表達(dá)水平無(wú)明顯差異。加藥后24小時(shí),模型MCM組突觸素。mRNA水平相對(duì)于正常對(duì)照組顯著降低；低劑量用藥MCM組突觸素mRNA水平與模型組比較顯著增高,但仍低于正常對(duì)照組；高劑量用藥MCM