雷公藤甲素脂質(zhì)納米粒研究.pdf

1、雷公藤甲素（Triptolide，TP）是傳統(tǒng)中藥雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook F，TWHF）中最具代表性的、集活性和毒性于一身的化合物。TP具有廣泛的生物活性，包括抗炎、免疫抑制、抗生育及抗腫瘤等。然而治療窗窄和對肝、腎、消化道、生殖系統(tǒng)、血液系統(tǒng)等的嚴(yán)重毒性限制了TP的臨床應(yīng)用。TP口服給藥后被機(jī)體迅速吸收并被快速消除：在大鼠中，達(dá)峰時(shí)間Tmax在10.0~19.5min之間，消除半衰期t1/2在1

2、6.8~50.6min之間；在小鼠中，Tmax、t1/2分別約為5.0和13.7min。TP的藥物動力學(xué)行為被認(rèn)為是良好的胃腸道滲透性、肝臟細(xì)胞色素P4503A酶的代謝和廣泛的組織分布三個(gè)因素綜合作用的結(jié)果。TP快速吸收入血和短暫停留導(dǎo)致血藥濃度波動較大，促進(jìn)了TP毒性的產(chǎn)生。因此，通過緩慢釋放藥物降低血藥濃度波動從而有效提高TP的安全性具有重要意義。大量研究結(jié)果表明，脂質(zhì)納米粒在實(shí)現(xiàn)藥物緩釋和減毒方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢，本論文首先制備并優(yōu)

3、化了雷公藤甲素固體脂質(zhì)納米粒，繼而制備了包封率和穩(wěn)定性更佳的雷公藤甲素納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，研究并比較了二者的藥物動力學(xué)、急性和亞急性毒性，為開發(fā)優(yōu)良的雷公藤甲素脂質(zhì)納米粒新制劑提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，也可為研究雷公藤甲素藥物動力學(xué)改變與其毒性降低之間的關(guān)系提供參考。本論文完成的主要研究工作有：
　?。?）研究了雷公藤甲素固體脂質(zhì)納米粒(Triptolide-loaded solid lipid nanoparticles，TP-SLN）兩種制

4、備方法（高壓均質(zhì)法和微乳法），并進(jìn)行了初步的處方篩選。結(jié)果表明TP在SLN制備過程中會向水相分配而不易包封，微乳法比高壓均質(zhì)法更適合制備具有較高包封率的TP-SLN；空白SLN的處方組成為：固體脂質(zhì)Compritol888 ATO，表面活性劑Cremophor RH40，助表面活性劑卵磷脂的TranscutolHP溶液（質(zhì)量比1:1）；在繪制偽三元相圖的基礎(chǔ)上，通過單因素實(shí)驗(yàn)確定了影響TP-SLN包封率的三個(gè)關(guān)鍵因素及取值范圍：脂質(zhì)百分

5、含量（40％~60％）、表面活性劑/助表面活性劑質(zhì)量比（2:1~6:1）、脂質(zhì)/藥物質(zhì)量比（50:1~100:1）。
　?。?）優(yōu)化了TP-SLN處方并研究了最優(yōu)TP-SLN的性能。采用三因素五水平中心復(fù)合設(shè)計(jì)（Central composite design，CCD），評價(jià)了脂質(zhì)百分含量（X1）、表面活性劑/助表面活性劑質(zhì)量比（X2）、脂質(zhì)/藥物質(zhì)量比（X3）三個(gè)因素對TP-SLN粒徑（Y1）、包封率（Y2）和載藥量（Y3）的影

6、響并優(yōu)化了TP-SLN。結(jié)果表明，Y1、Y2、Y3最優(yōu)的回歸模型均為二次多項(xiàng)式模型，用擬合方程預(yù)測的最優(yōu)處方為：X1=49.73％，X2=3.25，X3=55.27；最優(yōu)TP-SLN的各指標(biāo)分別為：粒徑179.8±5.7nm，包封率（56.5±0.18）％，載藥量（1.02±0.003）％，各預(yù)測值與實(shí)測值接近，預(yù)測效果良好；TP-SLN表現(xiàn)出明顯的體外緩釋特性；TP-SLN在人工胃液中溫孵3h后具有較好的穩(wěn)定性，粒徑未見明顯改變，且大

7、部分的藥物（91％）仍然被保留；SLN能夠降低TP口服誘導(dǎo)的大鼠胃刺激毒性，該保護(hù)作用與降低胃粘膜氧化應(yīng)激水平和減輕局部炎癥細(xì)胞浸潤有關(guān)。
　?。?）為改善TP-SLN的包封率和穩(wěn)定性，在最優(yōu)TP-SLN基礎(chǔ)上，采用微乳法制備了雷公藤甲素納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體（Triptolide-loaded nanostructured lipid carriers， TP-NLC）并進(jìn)行了表征。TP在液體脂質(zhì)Capryol90中的溶解度最大；Ca

8、pryol90在固-液脂質(zhì)二元混合物中的最優(yōu)比例為20％；電鏡下觀察發(fā)現(xiàn)TP-NLC和TP-SLN均近似于球形，TP-NLC平均粒徑較TP-SLN大（231.8±4.3nmvs.179.8±5.7nm,p<0.001），而PDI卻明顯較小（0.143±0.012vs.0.283±0.012,p<0.001）；TP-NLC包封率明顯提高[(71.6±0.6)％vs.(56.5±0.2)％,p<0.001]；TP-NLC粒徑在一個(gè)月內(nèi)基本沒

9、有變化（p>0.05），而TP-SLN粒徑從179.8±5.7nm增加到200.2±7.4nm（p<0.05）；TP-NLC貯存一個(gè)月后包封率略減（從71.6％降到69.1％，p>0.05），相比之下，TP-SLN包封率顯著降低（從56.5％降到48.3％，p<0.01）；TP-NLC的體外緩釋效果較TP-SLN好，48 h的累積釋放度為71.2％，顯著小于TP-SLN的91.3％（p<0.001）。
　?。?）研究了大鼠口服給予

10、雷公藤甲素脂質(zhì)納米粒（TP-NLC和 TP-SLN）后體內(nèi)藥物動力學(xué)。建立了測定血漿中TP含量的HPLC-MS方法學(xué)；相對于TP混懸液，TP-NLC和TP-SLN的血藥濃度-時(shí)間曲線均明顯平緩；TP的Tmax和t1/2z分別為0.200±0.075h和0.706±0.087h；與TP比較，TP-NLC和TP-SLN的Tmax均明顯推遲，分別為0.717±0.240 h（p<0.01）和0.450±0.183h（p>0.05），t1/2z

11、顯著延長，分別為1.509±0.216h（p<0.01）和1.544±0.574h（p<0.01）；TP-NLC的Cmax從TP的8.656±2.077μg/L下降到3.361±0.666μg/L（p<0.01），TP-SLN的Cmax下降到5.794±1.747μg/L（p<0.05）；與TP比較，TP-NLC和TP-SLN的CLz/F也顯著降低（p<0.01，p<0.05）；TP-NLC和TP-SLN的AUC0–t分別為9.012±

12、1.576μgh/L,7.318±1.628μgh/L，分別是TP的AUC0–t的1.54倍和1.25倍；與TP-SLN比較， TP-NLC的MRT0-t和Tmax顯著延長（p<0.001， p<0.05），Cmax顯著降低（p<0.05），顯示出更加理想的藥物動力學(xué)行為。
　?。?）研究了雷公藤甲素脂質(zhì)納米粒（TP-NLC和TP-SLN）的小鼠急性毒性和大鼠亞急性毒性。TP-NLC，TP-SLN和TP小鼠口服的LD50分別為1.

13、87mg/kg，1.50mg/kg，1.08mg/kg（以雷公藤甲素計(jì)）；亞急性毒性試驗(yàn)結(jié)果表明，NLC能夠顯著緩解大鼠長期口服TP所引起的體重增長抑制，避免誘導(dǎo)大鼠心、肺、肝、脾和腎等臟器相對重量的變化，效果優(yōu)于SLN；在TP低劑量水平（500μg/kg），NLC和SLN都能有效降低TP的肝毒性，劑量升高時(shí)（650μg/kg），SLN對肝和腎的減毒效果不明顯，但TP-NLC仍表現(xiàn)出良好的安全性，提示NLC減毒效果明顯好于SLN；在高劑

14、量水平（650μg/kg），與TP組相比，TP-NLC組大鼠表現(xiàn)出顯著降低的血清MDA含量（p<0.05）和顯著升高的SOD活力（p<0.05），提示NLC減毒機(jī)理與降低TP誘導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化損傷有關(guān)；高劑量TP-SLN組發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞脂肪變性，腎小管擴(kuò)張和脾巨噬細(xì)胞死亡，而TP-NLC組未見明顯病理改變。
　　本論文的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明NLC和SLN均能顯著改善TP口服后的藥物動力學(xué)參數(shù)，并能有效提高TP的安全性，且TP-NLC優(yōu)于TP-S