探究CUL4B表達(dá)對胃癌細(xì)胞的影響.pdf

1、據(jù)統(tǒng)計(jì)，胃癌是世界上第五大惡性腫瘤，致死率占世界第三位[1]。胃癌在不同國家和地區(qū)之間的發(fā)病率存在很大差異，亞洲地區(qū)胃癌病例數(shù)占世界總病例數(shù)的73.6％，其中中國的胃癌患者數(shù)占世界的42.7％。在2015年中國確診的癌癥病例中，男性的胃癌發(fā)病率占全部癌癥發(fā)病率的第二位，女性的為第三位。針對胃癌的主要治療方法包括手術(shù)切除、化療、免疫療法和定向治療。雖然近年來診斷和治療技術(shù)都有所提高，但是晚期胃癌病人的生存期仍舊低于1年，臨床上缺乏診斷早期

2、胃癌的有效方法，晚期胃癌病人預(yù)后很差。
　　CUL4B(Cullin4B)作為支架蛋白參與構(gòu)成E3泛素連接酶復(fù)合物Cullin4B-Ring E3 Ligase(CRL4B)，參與調(diào)節(jié)包括細(xì)胞周期、細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因轉(zhuǎn)錄和生物體個(gè)體生長發(fā)育等多項(xiàng)重要生命活動(dòng)。CRL4B不僅可以通過泛素化降解p53和cyclin E參與調(diào)控細(xì)胞增殖和衰老過程，還能通過單泛素化H2A蛋白，調(diào)節(jié)靶基因啟動(dòng)子組蛋白H3的乙酰化以及甲基化等過程，從而在表觀

3、遺傳水平上調(diào)控p16、p21、PTGDS、miRNA-371/372等基因的表達(dá)。
　　越來越多的證據(jù)顯示CRL4B在腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。CRL4B可以通過單泛素化H2AK119，抑制Wnt拮抗因子、PTEN、IGFBP3和miR-194的表達(dá)。在宮頸癌、肝癌和非小細(xì)胞肺癌等癌癥中，CRL4B通過抑制腫瘤抑癌基因的表達(dá)發(fā)揮癌基因的功能。有趣的是，本實(shí)驗(yàn)室還有一項(xiàng)研究結(jié)果提示CUL4B可通過調(diào)節(jié)微環(huán)境中MDSC細(xì)胞的分化抑制

4、腫瘤的生長。因此，CUL4B在不同環(huán)境下在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展發(fā)揮不同的功能。截止到目前，CUL4B在胃癌中的作用還未見報(bào)道，為了探究CUL4B在胃癌中發(fā)揮的功能，我們首先檢測了CUL4B在胃癌組織中的表達(dá)水平，并分析了CUL4B表達(dá)對胃癌細(xì)胞增殖、遷移侵襲以及對化療藥物敏感性的影響。
　　首先，我們檢測了CUL4B在胃癌和癌旁組織中的表達(dá)，結(jié)果顯示，相對于癌旁組織，CUL4B在胃癌組織中表達(dá)水平明顯上調(diào)，并且CUL4B的表達(dá)與胃癌的

5、病理分級呈正相關(guān)。
　　隨后我們選用了三種胃癌細(xì)胞—MKN-45、BGC-823和SGC-7901，利用病毒感染，分別構(gòu)建了三種CUL4B低表達(dá)的胃癌細(xì)胞系和對應(yīng)的的空載體對照細(xì)胞系，并且構(gòu)建了MKN-45 CUL4B高表達(dá)細(xì)胞系和對應(yīng)的空載體對照細(xì)胞系。我們利用MTT實(shí)驗(yàn)檢測了CUL4B表達(dá)降低后胃癌細(xì)胞增殖活性的改變，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CUL4B表達(dá)降低抑制胃癌細(xì)胞增殖活性。利用流式法檢測細(xì)胞周期時(shí)我們并未發(fā)現(xiàn)CUL4B表達(dá)降低對胃癌細(xì)

6、胞周期存在顯著影響，利用細(xì)胞動(dòng)力學(xué)分析顯示CUL4B不影響胃癌細(xì)胞G1/S其以及M/G1期進(jìn)程，EdU摻入實(shí)驗(yàn)也顯示CUL4B表達(dá)降低對胃癌細(xì)胞DNA合成無明顯影響，提示CUL4B調(diào)控胃癌細(xì)胞增殖活性并不是通過對以上過程的調(diào)控而實(shí)現(xiàn)的。
　　接下來我們利用transwell實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)分析CUL4B表達(dá)對胃癌細(xì)胞遷移侵襲能力的影響，劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，相對于對照細(xì)胞，CUL4B表達(dá)降低的細(xì)胞遷移能力明顯下降。
　　隨后，我們

7、采用MTT實(shí)驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn)，相對于對照細(xì)胞，低表達(dá)CUL4B的胃癌細(xì)胞對于同等濃度化療藥物順鉑和吡柔比星的敏感性增加。TUNEL實(shí)驗(yàn)分析顯示CUL4B低表達(dá)胃癌細(xì)胞在順鉑處理后凋亡比例更高。這些結(jié)果表明CUL4B參與調(diào)控胃癌細(xì)胞對化療藥物的敏感性。
　　總之，通過本研究我們證實(shí)了CUL4B在胃癌中表達(dá)上調(diào)，并且CUL4B表達(dá)水平與胃癌的病理分級呈正相關(guān);細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示抑制CUL4B表達(dá)會抑制胃癌細(xì)胞的增殖活性、侵襲遷移能力并增加胃