致密核心囊泡分泌過程中所需的Rab蛋白及其效應(yīng)物.pdf

1、細(xì)胞內(nèi)各個細(xì)胞器之間囊泡的膜轉(zhuǎn)運(yùn)過程是真核細(xì)胞存在的基本。Rab蛋白確保了轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白被運(yùn)輸至正確的目的地。Rab蛋白是小GTP酶中的一大家族，它通過募集其效應(yīng)物蛋白，其中包括接頭蛋白，栓系因子，激酶，磷酸酶以及動力蛋白等，調(diào)控了細(xì)胞膜的選取，囊泡出芽，去包被，轉(zhuǎn)運(yùn)以及膜融合等過程。線蟲作為模式生物有很多優(yōu)勢，例如生活周期短，遺傳操作方便，蟲體透明等，這些優(yōu)勢有利于神經(jīng)傳遞的分子機(jī)制研究。本文主要以線蟲為研究對象，研究在致密核心囊泡（DCV

2、）分泌過程中所需的Rab蛋白及其效應(yīng)物。
　　致密核心囊泡分泌的轉(zhuǎn)運(yùn)，栓系，錨定和成熟等過程的分子機(jī)制現(xiàn)在還存在爭論。在我們的研究中，我們使用線蟲這種模式生物來研究Rab蛋白和它的效應(yīng)物在致密核心囊泡分泌過程中起到的作用。我們通過分析腔胞吸收GFP標(biāo)記的神經(jīng)肽的熒光強(qiáng)度檢測活體線蟲中神經(jīng)肽的釋放。隨后我們應(yīng)用全內(nèi)反射熒光顯微鏡（TIRFM）技術(shù)來追蹤單個致密核心囊泡在細(xì)胞膜附件的運(yùn)動。通過這些方法，我們發(fā)現(xiàn)RAB-27/AEX-6

3、是神經(jīng)肽釋放所必須的，而和RAB-27密切同源的RAB-3則不是神經(jīng)肽釋放所必須的。我們發(fā)現(xiàn)RAB-27/AEX-6和致密核心囊泡的轉(zhuǎn)運(yùn)和栓系相關(guān)。
　　我們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)不同的Rab蛋白效應(yīng)物作用于致密核心囊泡分泌的不同步驟：Rabphilin/RBF-1與最初的栓系和穩(wěn)定的錨定相關(guān)，而RIM/UNC-10則是作用于穩(wěn)定的錨定并且為致密核心囊泡的融合做準(zhǔn)備。RAB-27和Rabphilin/RBF-1相互作用調(diào)控了囊泡和細(xì)胞膜的最初