致密核心囊泡調控蛋白作用機制研究.pdf

1、囊泡的運輸涉及轉運,錨定等多個步驟,這些步驟是由許多蛋白質參與完成的。這些步驟的確切劃分和其中起作用的眾多蛋白質的相互作用目前尚不十分清楚。在當前研究中,致密核心囊泡(Dense Core Vesicles,DCVs)和突觸囊泡(Synaptic Veslcles,SVs)的基本分泌機制是類似的,而同時DCVs和SVs特性上的諸多差異又預示了這兩類囊泡在分泌過程中使用了不同的分子。因此,SVs中相關蛋白的研究為研究DCVs提供了很多參考

2、。本文利用全細胞膜電容檢測技術,碳纖電極電化學檢測技術,結合全內反射熒光顯微鏡(TIRFM)的手段,對DCVs運輸相關調控蛋白機制做了一定的研究。
　　本文在大鼠嗜鉻細胞的瘤細胞(PC12)上研究了Synaptotagmin I,Synaptotagmin IX的對細胞胞吐的影響。目前尚不清楚各種Synaptotagmin Syt亞型是獨立調控不同類型的囊泡還是協(xié)同作用。通過使用short hairpin RNA(shRNA)對S

3、yt I,Syt IX的表達進行沉默,通過電化學分析(碳纖電極的使用)和Tirfm的方法檢測的結果,發(fā)現(xiàn)Syt I和Syt IX表達量同時下調導致鈣依賴的大囊泡胞吐顯著減少,而單獨下調沒有顯著影響。同時Syt I和Syt IX表達量同時下調是更多的囊泡以―kiss-and-run‖的方式胞吐。結果表明Syt I和Syt IX冗余作用于Ca2+觸發(fā)的大囊泡釋放和融合孔擴張。
　　本文還在模式生物線蟲的神經元胞體(ALA)上進行了Ra

4、b27和Rab3對致密核心囊泡分泌的調控機制研究。秀麗隱桿線蟲(Caenorhabditis elegans)在突觸傳遞的研究中顯示了極大的優(yōu)勢,但是缺乏直接監(jiān)測DCVs分泌過程的功能分析手段。通過采用本實驗室獨創(chuàng)的膜電容檢測和全內反射熒光顯微成像的技術方法以及結合突變體的分析研究表明Rab27是DCVs胞吐活動中起重要作用。其機制與Rab3有冗余作用,對于囊泡的錨定和使囊泡穩(wěn)定在錨定狀態(tài)有重要影響。同時發(fā)現(xiàn)Rab27和可能的下游受體R