蛋白激酶B在全氟辛烷磺酸致肝細(xì)胞胰島素抵抗中的作用研究.pdf

1、目的：全氟辛烷磺酸（PFOS）是一種持久性有機(jī)污染物，其對(duì)環(huán)境的污染問(wèn)題已引起了廣泛關(guān)注。流行病學(xué)研究表明PFOS與胰島素抵抗的發(fā)病有關(guān)，但具體分子機(jī)制尚不明確。我們?cè)谇捌谘芯恐邪l(fā)現(xiàn)PFOS可激活人肝HepG2細(xì)胞自噬過(guò)程。由于細(xì)胞自噬激活劑雷帕霉素可通過(guò)抑制哺乳動(dòng)物雷帕霉素復(fù)合物2（mTORC2）引起胰島素抵抗，而 mTORC2可調(diào)節(jié)蛋白激酶 B（AKT）磷酸化，并影響其下游靶基因如磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）的表達(dá)，最終降低

2、細(xì)胞對(duì)胰島素的敏感性，但PFOS是否通過(guò)此途徑引起細(xì)胞的胰島素抵抗還不清楚。因此，本研究擬探討PFOS誘導(dǎo)胰島素抵抗過(guò)程中AKT的作用。
　　方法：用MTT實(shí)驗(yàn)和乳酸脫氫酶（LDH）釋放實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PFOS對(duì)HepG2細(xì)胞存活率的影響；用胰島素誘導(dǎo)的葡萄糖攝取評(píng)估細(xì)胞胰島素敏感性；用油紅 O染色評(píng)價(jià)細(xì)胞內(nèi)甘油三酯水平；用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western blot）檢測(cè)AKT和mTOC2蛋白表達(dá)水平，用Western blot和免疫熒光

3、染色法檢測(cè)p-AKT的蛋白表達(dá)水平；用RT-qPCR檢測(cè)AKT的靶基因PEPCK mRNA的相對(duì)表達(dá)水平。
　　結(jié)果：250μM~300μMPFOS處理細(xì)胞24 h，細(xì)胞存活率顯著下降。在后續(xù)實(shí)驗(yàn)選擇的濃度范圍100μM~200μM，PFOS未表現(xiàn)出明顯細(xì)胞毒性。100μM~200μM處理24h后的細(xì)胞，胰島素刺激的葡萄糖攝取呈劑量依賴(lài)性下降。油紅 O染色結(jié)果表明100μM~200μM處理HepG2細(xì)胞24h后，細(xì)胞中甘油三酯含量